歯周病原性菌の分泌蛋白質により惹起される歯周組織の局所免疫応答に関する研究

牙周病原菌分泌蛋白诱导牙周组织局部免疫反应的研究

• 批准号: 08771708
• 负责人: 谷 芳子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771708/
• 关键词: Actinobacillus actinomycetemcomitans; 抗原性蛋白質; 炎症性サイトカイン

歯周病原性菌であるActinobacillus actinomycetemcomitans(A.a)Y4株の培養上清を高速液体クロマトグラフィを用いて、クロマトフォーカシングとゲル濾過カラムにかけ、さらに透析を繰り返して、37kDa蛋白質を抽出した。精製したサンプルは、72.3%の蛋白質、13.3%のヘキソースと2.8%のヘキソサミンを含んでおり、LPSの混入は無視できる量であった(A.aのLPSとエンドトキシンユニットで比較して10^<-5>以下であった)。二次元電気泳動で展開したところ、目的とする37kDa蛋白質のみが単一スポットとして銀染色で確認された。歯周ポケットからA.aが検出された歯周炎患者の末梢血から血清を採取し、精製37kDa蛋白質に対する血清抗体価を調べたところ7.20で、歯周炎のないコントロール5.28より有意に高かった(p<0.001)。精製37kDa蛋白質を50,5,0.5μg/ml濃度で2×10^6cell/mlのマウス腹腔マクロファージに反応させたところ、24時間刺激で濃度依存的に炎症性サイトカイン(TNF-α、IL-1β、IL-6)を産生させた。この反応は、精製37kDa蛋白質を熱処理することで有意に低下した。ヒト歯肉癌由来の上皮様細胞Ca9.22(5×10^4cell/ml)を無血清培地KGM IIで維持し、10,1,0.1μg/ml濃度の精製37kDa蛋白質で刺激したところ、わずかに炎症性サイトカインを産生する傾向が見られたものの、反応は検出限界以下であった。今後さらに、細胞数や刺激濃度等を変えて、調べていく予定である。

The culture supernatant of Actinobacillus actinomycetemcomitans(A.a) Y4 strain was purified by high speed liquid chromatography, filtration, dialysis and extraction of 37kDa protein. In addition, 72.3% of protein, 13.3% of protein and 2.8% of LPS were refined, and the amount of LPS mixed in was no longer visible (A.a. LPS was mixed in less than 10%<-5>). Two-dimensional electrophoresis was performed to confirm the presence of a 37kDa protein. A.A. was detected in peripheral blood serum from periodontitis patients. Serum antibody levels were adjusted to 7.20 and 5.28 for purified 37kDa protein (p&lt;0.001). Purified 37kDa protein was produced at concentrations of 50, 5, and 0.5 μg/ml at 2× 10^6 cells/ml and 24 time-dependent inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, and IL-6). The protein was purified by heat treatment. Ca9.22(5× 10^4 cell/ml) was maintained in serum-free culture of epithelial cells derived from dental cancer at concentrations of 10,1,0.1μg/ml and purified 37kDa protein was found to stimulate and inhibit inflammatory response. In the future, the number of cells and the stimulation concentration will be changed and adjusted.

项目成果

谷芳子 ほか: "炎症性サイトカイン産生を誘導するActinobacillus actinomycetemcomitansの産生物について" 日本歯周病学会会誌. 38巻秋季特別号. 161- (1996)

Yoshiko Tani 等人：“诱导炎症细胞因子产生的放线杆菌的产物”，日本牙周病学会杂志，第 38 卷，秋季特刊，1996 年。