P19細胞および網膜細胞の分化系におけるNotchシグナル伝達経路の解明
P19细胞和视网膜细胞分化系统中Notch信号通路的阐明
基本信息
- 批准号:08780710
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1.DII1-Notch1-Hes1シグナルの検出系の確立yeast two hybrid system及びPCRによってNotch1、DII1のcDNA及びHes1 promoterを単離した。これらを用いてサイトメガロウイルスのプロモーターの下流にNotch1,DII1のcDNAをつないだconstruct(pCDNA3-Notch1,pCDNA3-DII1)およびHES1のプロモーターの下流にルシフェラーゼ遺伝子をつないだconstruct(pGVB-HES1)を作成した。現在はNIH3T3細胞にpCDNA3-DII1を導入しDII1がゲノム中に組み込まれた9クローンについてDII1蛋白の過剰発現を確認中である。P19細胞にpCDNA3-Notch1を導入した細胞については、何度かのスクリーニングを行ったが得られておらず、Notch1蛋白の過剰発現が細胞にtoxicである可能性がある。今後は、一過性発現による系及び、テトラサイクリンによるinducibleな系でのNotchの過剰発現を試みる予定である。2.変異型のNotch1,DII1蛋白質のNotchシグナル伝達系に及ぼす影響の検討Dominant negative型として働くと推測される変異型Notch1,DII1の発現ベクターを作成した。1の系が確立すれば変異型の蛋白の影響を検討する。3.Notchシグナルの関与の検討Notch1及びDII1の細胞外部分に対するポリクローナル抗体を作成した。これらの抗体により、網膜細胞、胸線細胞、骨髄細胞が染色されることより、その分化過程にNotchシグナルが関与することが示唆される。今後どのような細胞系列がNotchあるいはDII1を発現しているかを検討し、Notchシグナルの増減による分化への影響を調べる。
1. Establishment of a yeast-two hybrid system for the detection of DII1-Notch1-Hes1 complex and separation of Notch1 and Hes1 promoters by PCR. This is done by using the cDNA component construct(pCDNA3-Notch1,pCDNA3-DII1) and HES1 cDNA component construct(pGVB-HES1). Now, pCDNA 3-DII 1 is introduced into NIH 3T3 cells, and the expression of DII1 protein is confirmed. P19 cells pCDNA3-Notch1 is introduced into the cell, and the possibility of toxic expression of Notch1 protein in the cell is discussed. In the future, the transient occurrence of the system and the induction of the transient occurrence of the system will be determined. 2. Notch1,DII1 protein expression system and its influence on dominant-negative pattern analysis. 1. To establish the influence of heterotypic proteins on the system. 3. Notch1 and Notch 2 are related to the development of antibodies to Notch1 and Notch 2 extracellular components. The antibody, omental cells, thoracic cells, and bone marrow cells were stained and the differentiation process was described. In the future, we will discuss the influence of differentiation on the development of Notch and DII1 cell series.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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专利数量(0)
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