実験動物潜伏ウイルス感染症への分子病理学的(in situ PCR)診断法の応用

分子病理学（原位PCR）诊断方法在实验动物潜伏病毒感染中的应用

• 批准号: 08780801
• 负责人: 大沢 一貴
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780801/
• 关键词: 遺伝子診断; マウスコロナウイルス; ラットコロナウイルス; NHV-Ku株; シークエンス

感染細胞および感染個体材料を用いたマウスおよびラットのコロナウイルス感染症の遺伝子診断法を開発した。この過程で抽出されたMHV-Ku株のRNAを部分的にシークエンスした結果、これまでに報告されていない新株であることが明らかになった。MHV-JHM,-N,-2をCMT-93細胞で、SDAV-681,Perker's RCVをRCN-9細胞で増殖させ、vitroでの感染細胞材料とした。さらに臨床材料として、ラットではSDAV感染症を強く疑う4個体(Wky1例:36w,SHR 1:36w,Wistar 2:7w)の唾液腺およびハーダー腺を、マウスでは血清学的に抗MHV抗体価が高いとされるコロニー由来7個体(C57BL/6 雌5:7w,雄2:13w)の腸管、糞便および脳をそれぞれ用いた。これら材料から総RNAを抽出し、RT-nested PCR産物のダイレクトシークエンスを行い、ウイルス感染症の診断およびウイルス株の特定を試みた。MHV-JHM,-N,-2,SDAV-681,PRCVの5種および臨床材料に共通しておよそ175bpのバンドが検出された。検出率はラットの唾液腺、ハーダー腺ともに4/4,マウスでは腸管および糞便で4/7(陽性個体一致)、脳では0/7だった。既知10種のげっ歯類コロナウイルスのなかで、NHV-Ku株と完全一致するシークエンスを持つウイルスは存在しなかった。ホモロジーの高い順にDVIM(92%)>Y,S,A59,3(89%)>1,JHM>SDAVとなった。アミノ酸レベルでは、MHV-Ku株はDVIM(1/58)やY(2/58)とはほとんど差異がなかったが、JHM(10/58)やSDAV(14/58)とは比較的多くの不一致が認められる結果となった。

Infected cells and infected individual materials are used to develop genetic diagnostics for infectious diseases. This process is to extract the MHV-Ku strain RNA part of the results, and report to the new strain. MHV-JHM,-N,-2, CMT-93 cells, SDAV-681,Perker's RCV, RCN-9 cells were cultured and vitro-infected cell materials were obtained. In addition, the clinical materials were collected from 4 individuals (Wky1 case:36w,SHR 1:36 w,Wistar 2:7w), and the salivary glands and serological anti-MHV antibodies were detected from 7 individuals (C57BL/6 female 5:7w, male 2:13w). RNA extraction, RT-nested PCR products, diagnosis of infection, and strain-specific testing MHV-JHM,-N,-2,SDAV-681,PRCV are five common clinical materials. 4/4 of salivary glands, 4/7 of intestine and 4/7 of faeces. It is known that there are 10 species of NHV-Ku strains that are completely consistent with each other. DVIM(92%)>Y,S,A59,3(89%)>1,JHM>SDAV. DVIM(1/58) Y(2/58)