キャピラリー電気泳動-化学発光検出による特異的徴量タンパク質の分離・定量-色素包括リポソームを標識剤とする免疫分析-
毛细管电泳 - 通过化学发光检测分离和定量特定特征蛋白质 - 使用染料封装的脂质体作为标记剂的免疫测定 -
基本信息
- 批准号:09750892
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 1998
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
色素包括リポソームでタンパク質を標識し、キャピラリー電気泳動で分離、そして化学発光検出するという新しいタンパク質の分離・検出法を検討した。標識剤としての色素包括リポソームは、泳動後キャピラリー先端での化学発光試薬(有機溶媒)と混合され、リポソーム膜の崩壊により、多量の蛍光色素を放出する。それらを化学発光検出することにより超高感度なタンパク質検出が可能となる(「増幅型」の検出)。まず、色素包括リポソームで標識されたタンパク質を泳動させるに先だって、泳動溶液中のpH、化学種組成などがリポソーム膜へ与える影響について調べた。色素包括リポソームは、化学発光検出するにあたり、その条件下で十分に安定であることがわかった。次いで、実際に色素包括リポソームで標識したタンパク質の泳動挙動を調べ、検量線を作成し検出下限を確認した。さらに、これらの実験の結果を踏まえて、抗体固定化ガラスビーズを用いて行う免疫分析法とキャピラリー電気泳動-化学発光検出装置との組み合わせを検討した。まず、坑-人血清アルブミンを固定化したガラスビーズを用いて免疫反応を行った(競合法)。この時、標識剤にはエオシンY包括リポソームを用いた。反応溶液をキャピラリー電気泳動-化学発光検出装置で分離・検出した。化学発光系はシュウ酸ビス(2,4,6-トリクロロフェニル)オキサレート-過酸化水素系を利用した。人血清アルブミンの検出下限は5x10^<-6>M(15nM)で、定量濃度範囲は5x10^<-6>M〜5x10^<-4>Mであった。また、本法をヒトコントロール血清中のタンパク質定量に応用した。
Pigments include: identification, electrophoresis, chemical detection, and identification of new species. The pigment of the marking agent includes the chemical reagent (organic solvent), the mixture of the solvent and the film, and the release of a large amount of the pigment. For example, chemical emission detection is possible with ultra-high sensitivity detection ("amplitude type" detection). Color, pigment, including color, solvent, solvent, solvent Pigments are very stable under the conditions of light emission and chemical emission. In the second place, the actual pigment includes the identification of the quality of the swimming movement, the adjustment of the quantity line, and the confirmation of the detection lower limit. The results of this study were discussed in detail, including antibody immobilization, electrophoresis and chemical detection. Immobilization of human serum and immune response (competition method) This time, the logo is included in the list. Electrophoresis and chemical emission detection devices are used for separation and detection of reaction solutions. The chemical evolution system is based on the utilization of the acid system (2,4,6-triphenyl). The detection limit of human serum albumin is 5x10^<-6>M(15nM), and the quantitative concentration range is 5x10^<-6>M ~ 5x10^<-4>M. This method is used for quantitative analysis of serum samples.
项目成果
期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kazuhiko TSUKAGOSHI: "Separation Behavior of Biological Constituents Having cis-Diol Groups thraigh the Interaction with Phenylboronic Acid Sites Introduced on the Inner Wall of Fused-Sillica capillary" Ball.Chem.Soc.Jpan.71. 2831-2836 (1998)
Kazuhiko Tsukagoshi:“具有顺式二醇基团的生物成分通过与熔融二氧化硅毛细管内壁上引入的苯基硼酸位点相互作用的分离行为”Ball.Chem.Soc.Jpan.71。
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kazuhiko TSUKAGOSHI: "Electrophoretic Separation and High-Sensitivity Detection of Dyestuff-Labeled proteing Using an Unitroated Fased-Silica Capillany and Sodium Dodecyl Suffate-Containiag Better for Migration and Labeling" Analytical Sciences. 13. 565-5
Kazuhiko Tsukagoshi:“使用未经处理的二氧化硅毛细管和十二烷基硫酸钠对染料标记的蛋白质进行电泳分离和高灵敏度检测,更适合迁移和标记”分析科学。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Masahiko HASHIMOTO: "Compact Qetection Cell Using Optical fiber for Sensitization and Simplification of Capillary Electrophoresis-Chemiluminescence Detector" J.Chromatogr.A. 832. 191-202 (1999)
Masahiko HASHIMOTO:“使用光纤实现毛细管电泳-化学发光检测器敏化和简化的紧凑型检测池”J.Chromatogr.A.
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kazuhiko TSUKAGOSHI: "Migration Behavior of Dystuff-containing Liposomes in Capillary Electrophoresis with Chemiluminestence Detection" J.Chromatogr.A. 813. 402-407 (1998)
Kazuhiko Tsukagoshi:“毛细管电泳中含有染料的脂质体的迁移行为与化学发光检测”J.Chromatogr.A.
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kazuhiko TSUKAGOSHI: "High-Sensitive Analysis of Heme Proteins Separated by Capillary Electrophoresis with On-line Chemiluminescence Detection Using a Laminol and H_2O_2 system" Analytical Sciences. 13. 279-281 (1997)
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塚越 一彦
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