权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

タバコ培養細胞によるヒト適応型糖鎖を持つタンパク質生産系開発のための細胞育種

使用培养的烟草细胞进行细胞育种，开发具有人类适应性糖链的蛋白质生产系统

基本信息

批准号：
09750877
负责人：
藤山和仁
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09750877/
关键词：
タバコガラクトース転位酵素糖鎖細胞育種タバコ培養細胞

项目摘要

ヒト由来β-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼ(GT)遺伝子を、Agrobacterium tumefaciensを介して植物培養細胞(タバコBY2細胞)に導入した。形質転換培養細胞GT6株を選抜し、導入した遺伝子の存在を確認した。本研究では以下の点について成果が得られた。1) GTタンパク質得られた培養細胞より細胞抽出液を調製し、GT活性を測定し発現を確認した。また、抗GTモノクローナル抗体でGTタンパク質を確認した。2) 糖鎖構造の解析タバコBY2細胞の糖タンパク質の糖鎖構造を決定し、GTの基質となる糖鎖構造が存在することを確認した。さらに、形質転換培養細胞GT6株における糖タンパク質の糖鎖構造の変化を解析し、糖鎖の末端にガラクトース残基が導入されていることをレクチンを用いて確認した。3) 形質転換培養細胞GT6株における外来遺伝子の発現ヒト由来インターフェロン-β遺伝子を植物細胞にて発現させることを試みたが、発現を確認できなかった。そこで、植物由来の糖タンパク質・西洋ワサビペルオキシダーゼの遺伝子を導入し、形質転換培養細胞で発現させ、レクチンを用いて、糖鎖にガラクトースが存在することを確認した。

The gene was introduced into plant culture cells (BY2 cells) by β-1,4-glucuronidase (GT) gene and Agrobacterium tumefaciens. GT6 strain was selected and introduced into the culture medium to confirm the existence of the mutant. This study is based on the following points: 1)GT quality was obtained from cultured cells, cell extracts were prepared and GT activity was determined. The anti-GT antibody was confirmed to have the same quality as the GT antibody. 2)Analysis of Glycolock Structure in BY2 Cells and Confirmation of the Existence of Glycolock Structure in GT Matrix In addition, the transformation of glycogen chain structure in GT6 cells was analyzed, and the terminal residues of glycogen chain were introduced. 3)The origin of foreign gene expression in GT6 cells was confirmed by experiment. The introduction of plant origin sugar, protein and gene, the development of morphologically transformed cultured cells, the use of sugar and the existence of sugar were confirmed.