腸上皮細胞のバリアー機能と病態の発生に関する研究-新しい分子モーターbarmotinを中心とした機能解析-

肠上皮细胞屏障功能与病理状况发生发展的研究 - 以新分子运动巴莫廷为中心的功能分析 -

• 批准号: 09770155
• 负责人: 飛岡 弘敏
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770155/
• 关键词: タイト結合; occludin; ZO-1; barmotin(7H6抗原); 腸上皮細胞; Minマウス

1. 共焦点レーザー顕微鏡を用いた、蛍光標識物質の細胞間透過性の半定量法を開発した。これを用いて、培養腸上皮細胞T84での培養条件の変化に伴うバリア機能とタイト結合関連蛋白、occludin、ZO-1、barmotin(7H6抗原)の消長を検討した。その結果、T84細胞のタイト結合でのbarmotinの発現には、細胞のbasolateral sideからの物質供給が必要であることが明らかとなった。2. APC遺伝子変異マウス(Min)は、腸管に多数のポリープを生じ、腺癌発生過程の解析に用いられている。Minマウスの空腸ポリープでのタイト結合関連蛋白の発現・局在を観察し、同時に、摘出したポリープに対する種々の分子量のFITC-dextran溶液の透過性を共焦点レーザー顕微鏡で観察し、タイト結合バリア機能をin situで検討した。その結果、同一ポリープにおいて、高分化腺癌部では、各タイト結合関連蛋白の発現は正常小腸上皮とほぼ同様の発現を示し、物質透過性の亢進も認められなかったが、低分化腺癌部では、タイト結合関連蛋白の発現は著明に低下し、物質透過性は選択的に亢進した。このことから、腸腺癌の悪性化過程において、タイト結合関連蛋白の発現異常とタイト結合バリア機能の低下が相関することが示された。3. タイト結合蛋白occludinはそのアミノ酸配列から、二つの細胞外ドメインをもつと考えられている。我々は、これらのドメインの機能解析を目的として、とラットoccludinの細胞外ドメイン持異抗体を作製した。得られた抗体により、occludin transfected-RLE細胞およびMDCK細胞の未固定状態での免疫染色で細胞間に線状の染色性を認めたことから、occludinの二つのドメインが細胞外に局在することが証明された。

1. A semi-quantitative method for detecting the intercellular permeability of fluorescent labeled substances by confocal microscopy was developed. This paper discusses the changes of culture conditions of cultured intestinal epithelial cells T84, and the changes of function and binding protein, occludin, ZO-1 and barmotin(7H6 antigen). As a result, T84 cells are bound to barmotin, and the basolateral side of the cell is supplied with substances. 2. APC gene differentiation (Min), intestinal tract, most of the different types of cancer, adenocarcinoma development process analysis of the use of middle and middle. The expression of FITC binding protein in the medium was observed by confocal microscopy, and the molecular weight of FITC binding protein in the medium was detected by confocal microscopy. The results showed that the expression of BAP in well differentiated adenocarcinoma was significantly lower than that in normal small intestine epithelium, and the expression of BAP in poorly differentiated adenocarcinoma was significantly higher than that in normal small intestine epithelium. This is an indication of the abnormal development and decreased function of binding proteins in the process of differentiation of intestinal adenocarcinoma. 3. The binding protein occludin is a protein that binds to cells outside the cell. For the purpose of functional analysis of these domaines, we have developed antibodies specific to the extracellular domaines of Luciferoccludin. The results showed that there was no fixed state of antibody, occludin, transfected-RLE cells and MDCK cells, and the linear staining between cells was confirmed.

项目成果

Sasaki,K. et al.: "Difference in the expression of three tight junction proteins, barmotin, occludin and ZO-1, in phenotypically different human colon cancer cell lines." Med.Electron Microsc.31. 61-67 (1998)

佐佐木，K.

Yamada-Sasamori,Y.et al.: "Rapid induction of 7H6 tight junotion-associated protein and paracellular barrier function in capillary endothelial cells of porcine brain in vitro by treatment with astrocyte conditioned medium and cAMP." Med.Electron Microsc.3

Yamada-Sasamori,Y.et al.：“通过星形胶质细胞条件培养基和 cAMP 处理，在体外猪脑毛细血管内皮细胞中快速诱导 7H6 紧密连接相关蛋白和细胞旁屏障功能。”

Yamada-Sasamori,Y.et al.: "Rapid induction of 7H6 tight junction-associated protein and paracellular barrier function in capillary endothelial cells of porcine brain in vitro by treatment with astrocyte conditioned medium and cAMP." Med.Electron Microsc.3

Yamada-Sasamori,Y.et al.：“通过星形胶质细胞条件培养基和 cAMP 处理，在体外猪脑毛细血管内皮细胞中快速诱导 7H6 紧密连接相关蛋白和细胞旁屏障功能。”

Tatewaki,K.et al.: "Cell density regulates crypticity of GM3 ganglioside on human glial cells." Exp.Cell Res.233. 145-154 (1997)

Tatewaki, K. 等人：“细胞密度调节 GM3 神经节苷脂对人类神经胶质细胞的神秘性。”

Kimura,H.et al.: "Bacterial lipopolysaccharide reduced intestinal barrier function and altered localization of 7H6 antigen in IEC-6 rat intestinal crypt cells." J.Cell.Physiol.171. 284-290 (1997)

Kimura, H.等人：“细菌脂多糖降低了肠道屏障功能并改变了 IEC-6 大鼠肠隐窝细胞中 7H6 抗原的定位。”