甲状腺ホルモンによる細胞の分化誘導とその分子機構の解析

甲状腺激素诱导细胞分化及其分子机制分析

• 批准号: 09770779
• 负责人: 櫻井 晃洋
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770779/
• 关键词: 甲状腺ホルモン; 細胞分化; アデノウイルス; 甲状腺ホルモン受容体

PC12細胞はnerve growth factor(NGF)の存在下でneuriteを伸ばし、神経細胞様の形態をとると同時に増殖停止に至ることが知られているが、この細胞に甲状腺ホルモン受容体応答エレメントを組み込んだアデノウイルス(Ad5PALx3tkLuc)を感染させたところ、甲状腺ホルモン濃度およびウイルス量に依存してluciferase activityの増加が認められ、この細胞でアデノウィルスを用いた実験系が機能することを確認した。ウイルス量は100MOIを超えると細胞毒性があらわれ、luciferase activityも低下する傾向にあったため、主な実験は50MOIのウイルス量で行い、甲状腺ホルモン(T3)の濃度が100nMの時に最大の反応が得られた。PC12細胞をウシ血清1%という低栄養の培養環境で維持すると、3日後に細胞数は約5倍となる。T3を培養液に添加しても細胞増殖には影響がない。一方50ng/mlのNGFを添加すると細胞の増殖は停止し、長いneuriteが出現してくる。これらを確認したのち、甲状腺ホルモンβ1受容体cDNAを組み込んだアデノウィルス(Ad5TRβ1-W)を感染させたPC12細胞で同様の実験を行うと、T3非存在下でNGFによる細胞分化が強く抑制された。T3を加えることによりこの抑制は解除された。甲状腺ホルモン不応症患者で同定された変異甲状腺ホルモンβ1受容体cDNAを組み込んだアデノウイルスではT3の効果は認められなかった。以上からPC12細胞のNGFによる分化に対してリガンド非結合甲状腺ホルモン受容体が負に作用していることが明らかになった。神経細胞は胎生末期から新生児期に急速に分化することが知られているが、甲状腺ホルモン受容体はこうした分化が適切な時期に起きるよう(早期におきすぎないよう)調節する役割を担っている可能性が考えられる。今後は胎生期とそれ以外の時期で受容体の機能を別個に調節している核内転写因子の同定と機能解析をめざしている。

PC12 cell nerve growth factor (NGF) has the following neurite stretch, cell morphology, cell morphology, cell cycle, cell cycle, thyroid gland, thyroid gland, kidney, kidney, The temperature of the thyroid gland is very high. The quantity depends on the luciferase activity. The cell is responsible for the monitoring of the thyroid gland. You can use the computer to make sure that the information is correct. The concentration of 100MOI was higher than that of cytotoxicity, the concentration of luciferase activity was lower than that of control, the concentration of 50MOI was higher than that of control, and the maximum response of 100nM was higher than that of thyroxine (T3). The serum concentration of PC12 was 1%, and the environment was maintained. After 3 days, the number of cells was about 5 times higher. T3 culture solution was added to the culture solution and the cell colonization was performed. One side added 50 ng/ml NGF to stop colonization, and long-term neurite showed that there was no infection. The cDNA of thyroid gland β 1 receptor (AD5TR β 1-W) was confirmed to be the same as that of the infected PC12 cells. The differentiation of NGF cells was strongly inhibited in the presence of T3. T3, add a small amount of gas, and then remove the suppression. In patients with thyroid incontinence, the thyroid gland

项目成果

Sakurai A et al.: "Ligand and nuclear factor-dependent change in hydrophobicity" Thyroid. 8(印刷中). (1998)

Sakurai A 等人：“疏水性的配体和核因子依赖性变化”甲状腺 8（出版中）。

Nagashima T et al.: "A novel point mutation of thyroid hormore receptor β gene---" Thyroid. 7(5). 771-773 (1997)

Nagashima T 等人：“甲状腺激素受体 β 基因的新型点突变——”甲状腺 771-773 (1997)。