肝阻血再灌流前後におけるエンドセリン受容体の局在ならびに発現動態に関する研究

肝缺血再灌注前后内皮素受体定位及表达动态研究

• 批准号: 09770981
• 负责人: 安井 智明
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770981/
• 关键词: liver; Ischemia; Reperfusion; Endothelin-1; Endothelin-A receptor; Endothelin-B receptor; Histocytochemistory; Western blotting; liver,; Ischemia,; Reperfusion,; Endothelin-1,; Endothelin-A receptor,; Endothelin-B receptor,

【目的】 肝臓外科で実際肝切除に付加する肝阻血前後でのET-1の結合部位ならびにET_A、ET_B受容体の局在と発現動態を、形態学的(超微細形態学)に検討する。【対象と方法】 肝阻血再潅流モデル:8週齢雄性Wister系ラットを用いて、肝門部で60分間肝左葉血行遮断を行い、血行再開前、再開後5分、60分の肝を採取。ET-1の結合部位ならびにET_A、ET_B受容体の局在と発現動態を、各抗体を用いて免疫組織化学的に、光顕ならびに電顕的に観察した。また、各レセプター抗体を用いてWestern blottingによる定量化(ET_A,49KDa,ET_B,51KDa)を行い、組織化学の結果を客観的に裏付けた。【結果】 1.肝組織中のET-1、ET_A、ET_B受容体の局在(阻血前):[ET-1]類洞壁内皮細胞の類洞側細胞膜上にのみ陽性反応が見られ、伊東細胞や肝細胞に陽性反応は見られない。[ET_A]類洞壁内皮細胞及び伊東細胞の類洞側細胞膜上に陽性反応がみられる。一方、一部の伊東細胞に不均一な陽性反応がみられ、肝細胞膜に陽性反応は見られない。[ET_B]類洞壁内皮細胞、伊東細胞の類洞側細胞膜の一部、肝細胞のDisse腔側の一部に陽性反応が見られるが肝細胞間隙の細胞膜上には見られない。2.小葉内分布:ET:及びET_A、ET_Bいずれもzone1はzone-3に比べて陽性反応が強かった。3.阻血後のET-1及びET_A、ET_B発現動態:組織学的に阻血中、阻血再潅流後ET-1及びET_A、ET_Bいずれも発現が亢進するが、ET-1は再潅流60分後、陽性反応はやや減弱した。阻血中、再潅流5、60分後のET_Aの蛋白量は阻血前の2.6、8倍に、ET_Bは12、7、9倍に増加した。【結論】 肝切除術に際して、エンドセリンによる再潅流障害は阻血再潅流早期よりみられ、その作用部位は類洞壁内皮細胞、伊東細胞のみならず肝細胞も一部関与しているものと考えられる。この組織学的結果は、現在解明されつつあるエンドセリンの生理学的作用機序を裏付けており、また、あらたにエンドセリンが肝細胞にも作用している可能性を示唆している。

[Objective] To investigate the dynamic and morphological changes of ET-1 binding sites and ET_A, ET_B receptors before and after hepatectomy in liver surgery. [Method] Liver obstruction and re-circulation:8 weeks old male Wister system was used in the middle, hepatic portal 60 minutes, left lobe blood circulation was blocked in the middle, blood circulation was reopened before, 5 minutes after re-opening, 60 minutes after liver. ET-1 binding sites and ET_A, ET_B receptors were detected by immunohistochemistry, light microscopy and electrophotography. Western blotting was used to quantify (ET_A,49kDa, ET_B,51kDa) and histochemical results were obtained. [Results] 1. ET-1, ET_A, ET_B receptors in liver tissue were present (before blood blocking): ET-1 positive reaction was observed on the membrane of endothelial cells and cave-like cells, Ito cells and hepatocytes. [ET_A] Positive reaction on the membrane of cave-like endothelial cells and Ito cells One side, one part of Ito cell, heterogeneous positive reaction, liver cell membrane positive reaction [ET_B] A part of the cell membrane on the hole-like side of the wall endothelial cells and Ito cells, and a part of the cell membrane on the disse-like side of the liver cells are positive. 2. The distribution of ET: ET_A, ET_B in the lobules was stronger than that of ET_A, ET_B in zone1 and zone 3. 3. The changes of ET-1, ET_A and ET_B after blood occlusion: Histological examination showed that ET-1, ET_A and ET_B increased after blood occlusion, and ET-1 decreased after 60 minutes of blood occlusion. After 5 and 60 minutes of reperfusion, the protein content of ET_A increased by 2.6 and 8 times, while that of ET_B increased by 12, 7 and 9 times. [Conclusion] During hepatectomy, there is a relationship between the reperfusion injury and the early reperfusion injury. The histological results show that the physiological mechanism of action of liver cells is possible.