悪性脳腫瘍のニトロソウレア剤耐性遺伝子の発現制御に関する分子生物学的研究

近年,腫瘍細胞のニトロソウレア剤耐性の指標としてDNA損傷修復酵素である O^6-methylguanine-DNA methyltransferase(MGMT)が注目されている.当研究室では1989年より脳腫瘍細胞のMGMT酵素活性とニトロソウレア剤耐性の関連について研究を重ね,in vitro,in vitroともにMGMT酵素活性が高値の腫瘍ほどニトロソウレア剤に対して抵抗性を示し,低値の腫瘍では感受性を示すことを報告してきた.また,臨床的にもMGMT酵素活性が脳腫瘍のACNU(ニトロソウレア剤)感受性の指標として有用であることを明らかにし,選択的化学療法の可能性を示してきた.昨年までの研究により,転写開始部位に対するハンマーヘッド型リボザイムが最も効率的にMGMTmRNAを切断することが判明しており,今回このリボザイムの改良型を作成し,この配列を内部に含む50mers の oligonucleotide を化学合成した.この oligonucleotide をpBlueScriptII(STRATAGENE 社)の MCS に挿入し,T7 RNA Polymerase を用いて in vitro transcriptionを行いリボザイムを合成,同様に T7 RNA Polymeraseを使用して作成した MGMT mRNA と in vitro で反応させ,リボザイムにより mRNAが分解させることを確認した.現在,MGMT が高発現している SF188 細胞に対して vector の導入を試みている.

近年,腫瘍細胞のニトロソウレア剤耐性の指標としてDNA損傷修復酵素である O^6-methylguanine-DNA methyltransferase(MGMT)が注目されている.当研究室では1989年より脳腫瘍細胞のMGMT酵素活性とニトロソウレア剤耐性の関連について研究を重ね,in vitro,in vitroともにMGMT酵素活性が高値の腫瘍ほどニトロソウレア剤に対して抵抗性を示し,低値の腫瘍では感受性を示すことを報告してきた.また,臨床的にもMGMT酵素活性が脳腫瘍のACNU(ニトロソウレア剤)感受性の指標として有用であることを明らかにし,選択的化学療法の可能性を示してきた.昨年までの研究により,転写開始部位に対するハンマーヘッド型リボザイムが最も効率的にMGMTmRNAを切断することが判明しており,今回このリボザイムの改良型を作成し,この配列を内部に含む50mers の oligonucleotide を化学合成した.この oligonucleotide をpBlueScriptII(STRATAGENE 社)の MCS に挿入し,T7 RNA Polymerase を用いて in vitro transcriptionを行いリボザイムを合成,同様に T7 RNA Polymeraseを使用して作成した MGMT mRNA と in vitro で反応させ,リボザイムにより mRNAが分解させることを確認した.現在,MGMT が高発現している SF188 細胞に対して vector の導入を試みている.