ヒト尿中蓚酸カルシウム結晶成長抑制物質に対するモノクローナル抗体の作製

人尿草酸钙晶体生长抑制剂单克隆抗体的制备

• 批准号: 09771199
• 负责人: 奥山 光彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771199/
• 关键词: 尿路結石症; シュウ酸カルシウム; ピーク3; bikunin; ウリナスタチン; ミラクリッド; 単クローン抗体

腎結石患者腎におけるPeak3の発現を免疫組織学的に検討した結果、カルシウム含有腎結石患者腎の方がコントロール腎より強陽性例の比率が減少しており、腎結石患者腎の遠位尿細管および集合管は正常腎よりPeak3の発現が減少していると考えられた。結石患者においてPeak3の発現が減少することで、結石形成がより促進されるということは、Peak3が尿路結石形成のinhibitorの一つとして機能していると考えられる。次に同様に精製したヒト尿中シュウ酸カルシウム結晶成長抑制物質であるPeak3のアミノ酸配列の同定を行った。Peak3の抗血清と反応させたWestern blottingの結果、30-45KDaの幅広いバンドが検出された。そのバンドをPVDF膜に転写後、protein sequencerでアミノ酸配列の解析を行った結果、bikuninのN末端12残基と100%一致したため、Peak3はbikuninであることが確認された。bikuninはInter-α-trypsin inhibitor(ITI)のlight chainである。ITIはHC1,HC2,bikunin,コンドロイチン硫酸鎖から構成される分子量23万の三量体でシュウ酸カルシウム結晶成長阻止物質として知られている。HC1,HC2がヒアルロン酸と結合する際にその遊離が起きる。2個のKunitz型trypsininhibitor domainを有するためprotease阻害活性をもつ。Bikuninは膵炎治療薬として市販されているウリナスタチン(商品名ミラクリッド)とほぼ同一物質であり、それらのシュウ酸カルシウム結晶成長抑制効果を比較検討したところ、Peak3はウリナスタチンより低濃度で強いシュウ酸カルシウム結晶成長抑制活性を有していることが判明した。Peak3,bikunin,ウリナスタチンはほぼ同一物質であり、今後これらの尿路結石症治療薬への応用が期待できると考えられる。これらの結果は、第85回日本泌尿器科学会総会、第343回日本泌尿器科学会北海道地方会等で発表した。

Immunohistologic examination of the expression of Peak3 in the kidney of patients with renal calculi showed that the ratio of strongly positive cases in the kidney of patients with renal calculi decreased, and the expression of Peak3 in the distal urinary tubules of patients with renal calculi decreased. In patients with urinary calculi, the occurrence of Peak3 is reduced, stone formation is promoted, and Peak3 is an inhibitor of urinary calculi formation. In addition, the crystal growth inhibiting substances in the urine were refined and determined by Peak3 and acid alignment. Peak3 antiserum and anti-Western blotting results, 30-45KDa amplitude search results The protein sequencers were identified by analyzing the nucleotide sequence of bikunin and the bikunin N-terminal 12 residues. bikuninはInter-α-trypsin inhibitor(ITI)のlight chainである。ITI is composed of HC1, HC2,bikunin, trimer, trimer and crystal growth inhibitor with molecular weight of 230,000. HC1, HC2 are free from acid binding. Two Kunitz-type trypsininhibitor domains were identified. Bikunin is an anti-inflammatory drug. It is a potent anti-inflammatory drug. It has been found that Bikunin has a strong anti-inflammatory activity at low concentrations. Peak3,bikunin, The results of this study were presented at the 85th Japan Society of Urology, the 343rd Japan Society of Urology, and the North Sea Society.