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子宮頸管粘液中の免疫グロブリンの結合蛋白の精製・同定と免疫性不妊症発症機序の解明

宫颈粘液中免疫球蛋白结合蛋白的纯化和鉴定以及免疫介导的不孕症发病机制的阐明

基本信息

批准号：
09771282
负责人：
前川正彦
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

平成9年度に同定したsecretory leukocyte protease inhibitor(SLPI)の免疫グロブリン結合能についてさらに検討を加えるとともに不妊婦人の頸管粘液中SLPI濃度を測定した。2種類のrecombinant SLPI(rSLPI)を還元あるいは非還元下でSDS-PAGEを行い、ブロットしたメンブレンをビオチン化ヒト免疫グロブリンと反応させ、AP結合ABCを用いて標識した。またrSLPIをglutathione(reduced form)あるいはprotein disulfide-isomerase(PDI)で処理し、非還元下で同様の処理を行った。SLPI濃度は不妊患者から同意を得て採取した頸管粘液を超音波処理後、ELISA法で測定した。同様に顆粒球エラスターゼ濃度をELISA法で測定した。1)rSLPIは還元下では約15kDの位置にバンドがあり免疫グロブリンと結合したが、非還元下では15kD以上のbroadなバンドとなり免疫グロブリンと結合しなかった。2)rSLPIを10mMのglutathioneで処理すると一部に15kDのバンドが出現し、そのバンドのみが免疫グロブリンを結合した。3)rSLPIをPDIで処理しても免疫グロブリンと結合しなかった。4)頸管粘液中のSLPI濃度は44.9±27.5μg/ml (2.7-144.3)と血中の約500倍も高濃度であった。5)SLPIは顆粒球エラスターゼと負の相関(r=0.37)を認めた。以上の結果は、SLPIの免疫グロブリン結合作用が生体内還元物質によって発現することを示唆している。またSLPIは顆粒球エラスターゼの抑制物質として知られており、SLPI濃度は局所の炎症によって変動している可能性が高い。

The concentration of SLPI in cervical mucus of non-pregnant women was determined in the same period of 2009. 2 kinds of recombinant SLPI(rSLPI) can be used in SDS-PAGE, AP and ABC. rSLPI (reduced form) is processed by protein divide-isomerase (PDI), and the same process is performed under non-reduced form. SLPI concentrations were determined by ELISA after ultrasonic treatment of cervical mucus. The same granulocyte concentration was determined by ELISA. 1) The rSLPI is about 15kD in position at the lower level of reduction and 15kD in broad range at the lower level of non-reduction. 2)rSLPI and 10mM glutathione were used to treat a portion of the 15kD protein and to bind the protein to the immune system. 3)rSLPI is processed by PDI. 4)SLPI concentrations in cervical mucus were 44.9±27.5μg/ml (2.7-144.3) and about 500 times higher in blood. 5)SLPI is negatively correlated with granulocyte (r=0.37). These results suggest that SLPI may play an important role in the development of metabolic factors in vivo. SLPI is highly likely to cause inflammatory changes due to the presence of inhibitory substances in granulocytes and SLPI concentrations.