唾液腺におけるcGIPDEのクローニング

唾液腺中 cGIPDE 的克隆

• 批准号: 09771566
• 负责人: 村田 琢
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771566/
• 关键词: phosphodiesterase; cAMP; cGIPDE

cGMP-inhibited cyclic nucleotide phosphodiesterase(cGIPDE)は,細胞内のcAMP濃度を調節することにより,心筋の収縮や脂肪細胞の脂肪代謝などに関係しているが,唾液腺のcGIPDEについての研究はほとんど行われていない。これまでにわれわれはin situ hybridization法によりラット唾液腺でcGIPDEが大量に発現していることを見いだし,また,唾液腺由来細胞と唾液腺にcGIPDE活性を認めた。以上のことより唾液腺においてcGIPDEは非常に重要な役割を有する可能性が示唆されたため,ラット唾液腺のcGIPDEのクローニング計画した。ラット顎下腺よりtotalRNAを調整し,逆転写酵素にてcDNAを合成後,additional regionを含むcatalytic domainをprimerとしてPCRを行い,予想どうりの大きさのバンドを得た。PCR産物のシークエンスよりcGIPDEであることを確認した。これをcDNAライブラリーのスクリーニングのプローブとして使用した。バキュロウイルスに発現させるために,これまでにクローニングしたcGIPDEのcDNAを発現ベクターのpVL1393バキュロウイルストランスファーベクターに挿入し,バキュロウイルスと共にSf9昆虫細胞に感染させ,ウエスタンブロッティングとcGIPDE活性の測定などを行いcGIPDEの発現を確認した。また,研究内容を平成10年に愛媛県で開催された第52回日本口腔科学会総会にて発表した。今後は更に唾液腺でのcGIPDEの役割を検討するためにノックアウトマウス作成や唾液腺疾患でのcGIPDEの異常等の検討を予定している。

cGMP-inhibited cyclic nucleotide phosphodiesterase(cGIPDE) regulates intracellular cAMP concentration, and its relationship to fat metabolism in adipocytes and cardiac muscle contractions. This is the first time that cGIPDE activity has been detected in salivary gland cells. The above mentioned salivary glands are very important for the development of cGIPDE. After cDNA synthesis,additional region containing catalytic domain primer and PCR were performed to obtain the desired gene. PCR products are identified This is the first time I've ever seen a person who's been in a position to do this. The cDNA of cGIPDE was discovered in pVL1393, and the cDNA of cGIPDE was detected in Sf9 insect cells. The 52nd Japan Stomatological Association Meeting was held in Ehime Prefecture in the tenth year of Heisei. In the future, the study of cGIPDE in salivary gland diseases will be further determined.