抗歯根抗体Fab断片を用いた破歯細胞の歯根面接着阻害による歯根吸収予防法の開発

开发利用抗牙根抗体Fab片段抑制破牙细胞与牙根表面的粘附来防止牙根吸收的方法

• 批准号: 09771845
• 负责人: 佛坂 斉祉
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771845/
• 关键词: 歯根吸収; 抗歯根抗体; Fab断片; 破歯細胞; 予防

実験準備.1.抗歯根抗体及び抗歯根抗体Fab断片の作製.すり潰した抜去歯牙歯根をアジュバントにしてラットに注射した。2週間後再度注射し、抗体価を計った後、血液を採取した。血清を遠心分離後、プロテインAカラムを使用しIgG分画を精製した。精製した抗歯根抗体をペプシンで消化し,ゲル濾過により抗歯根抗体Fab断片を得た。2.象牙より7×7mm象牙質切片を作製した。実験.In vitroにおける破歯細胞の歯根面への接着阻害試験及び吸収阻害試験.象牙質切片上に出生直後のウイスター系ラットの大腿骨より骨髄細胞を採取しα-MEN培地で10^6の細胞を象牙質切片上に播いた。37℃,1時間保温した後、リン酸緩衝液で3回洗浄し、グルタルアルデヒドで固定した後、TRAP染色により破歯細胞の数を測定した。結果は全付着細胞数が2560個であったのに対し、TRAP陽性細胞数は182個であった。さらに1週間培養して吸収窩の数を測定したところ、52個の吸収窩がみられた。象牙質を抗歯根抗体及び抗歯根抗体Fab断片で前処理したものと処理しなかったものを比較検討したところ、抗体の濃度依存的に接着細胞数と吸収窩数の減少がみられた。同時に破歯細胞の分化誘導に関して有力視されているサイトカイン(IL-6)の産生をELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)にて定量したところ、顕著な差異はみられなかった。以上の結果から抗歯根抗体Fab断片は破歯細胞の接着阻害によって吸収を阻害することがわかった。

1. Preparation of Anti-Dental Root Antibody and Fab Fragment of Anti-Dental Root Antibody. The tooth root of the tooth is removed and the tooth root is injected. After 2 weeks, the antibody was injected again, and the blood was taken. After the serum is isolated, the IgG is purified. The anti-thyroid antibody fragment was purified and digested. 2. Ivory 7×7mm dentin slices were prepared. In vitro, the adhesion resistance test and absorption resistance test of the dental root surface of the tooth cell were studied. Dentin slices were taken from the femur and 10^6 cells were seeded on the dentin slices. After incubation at 37℃ for 1 hour, the number of cells was measured after 3 cycles of washing in hydrochloric acid buffer solution, fixation with TRAP staining, and staining. The number of TRAP positive cells was 2560. The number of cells cultured for 1 week was determined, and 52 cells were cultured for 1 week. Dentin anti-dentin antibody and anti-dentin antibody Fab fragments were compared before treatment, and the number of cells and the number of colonies were decreased according to the concentration of antibody. At the same time, the differentiation induction of human dental cells is related to the production of IL-6 by ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay). These results suggest that the Fab fragment of anti-dental root antibody can inhibit the absorption of dental cells.

项目成果

Hotokezaka, H.: "Transcriptional analysis of the groESL operon from Porphyromonas gingivalis." Oral Microbiology and Immunology. 12. 236-239 (1997)

Hotokezaka, H.：“牙龈卟啉单胞菌 groESL 操纵子的转录分析。”

Horiuchi, A.: "Correlation between cortical plate proximity and apical root resorption." American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. (印刷中).

Horiuchi, A.：“皮质板接近度与根尖吸收之间的相关性。”美国正畸学和牙面整形外科杂志（正在出版）。