3次元培養法を用いた軟骨代謝の検討

使用3D培养法检查软骨代谢

• 批准号: 10770733
• 负责人: 大谷 和裕
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770733/
• 关键词: chondrocyte; alginate; nitric oxide; 軟骨細胞(chondrocyte); アルジネート(alginate)

平成10年に引き続き,軟骨代謝において最近注目されている一酸化窒素(NO)の軟骨細胞に対する作用を3次元培養法を用いて行った.NO合成阻害剤の存在下では培養液中のNO量はコントロールの1/3に減少した.培養液中のNOを消去することにより軟骨細胞周囲の基質(cell asociated matrix)と細胞外の基質(further removed matrix)のプロテオグリカン量は減少した.軟骨細胞のDNA合成能およびグリコサミノグリカン合成能は有意に抑制された.更に,ヒアルロン酸のレセプターと考えられているCD44の発現を免疫組織染色法で検討したところCD44の著明な発現低下を認めた.以上のことより恒常的に存在するNOが軟骨細胞の機能維持に必要なことが示唆された.次にこのNOの作用が軟骨細胞のアポトーシスに関与しているかを検討するために当科で購入した共焦点レーザー顕微鏡を用いて検鏡可能なAnnexinV法を用いてアポトーシスの検出を行う予定にしている.軟骨細胞の単層培養法でアポトーシスの発現が確認できた過酸化水素を添加して3次元培養法でもアポトーシスの発現が確認できるかを現在検討中である.この方法で3次元培養法でのアポトーシスの検出が可能であれば今後,NOのみならずサイトカインや他のガスメディエーターを用いた検討も予定している.

In the 10th year of Heisei, the effect of nitric oxide (NO) on cartilage metabolism was studied by three-dimensional culture method. In the presence of NO synthesis inhibitor, the NO content in culture medium decreased by 1/3. NO is eliminated from the culture medium, and the amount of NO in the culture medium decreases. Chondrocyte DNA synthesis is intentionally inhibited. In addition, the expression of CD44 was detected by immunohistochemical staining. The above constant presence of NO is essential for the maintenance of chondrocyte function. The effect of NO on chondrocytes is discussed in detail below. The confocal microscope can be used to determine the effect of NO on chondrocytes. The development of chondrocytes in monolayer culture was confirmed by addition of hyperacidified water and the development of chondrocytes in three-dimensional culture was confirmed by current investigation. This method is based on the three-dimensional culture method, and it is possible to use it in the future.