高気圧酸素療法時に発生する痙攀のフォーカスの解明

阐明高压氧治疗期间发生的惊厥焦点

• 批准号: 10770755
• 负责人: 竹内 護
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770755/
• 关键词: 高気圧酸素療法; 痙攀; ヒート・ショック蛋白; 痙攣; c-fos

高気圧酸素療法を2気圧以上で行うと、全身性の痙攀を起こすことがある。しかしこの痙攀が脳内のどの部位から発生するか、いまだ解明されていない。昨年度はc-fos蛋白に対するる免疫染色を施行し、梨状皮質、頭頂葉、海馬、歯状回、下丘に発現を認めた。これらの領域は抑制性アミノ酸であるGABAを多く含有する事が知られており、高気圧酸素痙攀に対するGABAの関与が疑われた。本年度は、高気圧酸素痙攀による障害部位を明らかにする目的で、痙攀発症の2時間後、24時間後にヒート・ショック蛋白(HSP72)に対する免疫染色を施行した。HSP72の陽性所見は、その部位に組織学的な障害を伴う強い侵襲が加わったことを示唆する。痙攀発生3時間後に4%のホルムアルデヒド溶液で潅流固定し、ビブラトームを用いて矢状断の切片(厚さ50μm)を作成した。切片に対し一次抗体(抗HSP72抗体、マウスで作成)、二次抗体(ビオチン化抗マウス抗体)、三次抗体(オキシダーゼ付きストレプトアビチン)を使用し、最後に過酸化水素と3,3'-diaminobenzidineを用いてHSP72を可視化した。痙攀2時間後のラットでは、HSP72蛋白の発現は認められなかったが、痙攀24時間後のラットでは下丘に強い発現を認めた。下丘はGABA産生酵素であるGADを最も多く含有する事が報告されている。これらの結果より、高気圧酸素による痙攀の発現には下丘の障害を伴うGABAの抑制が関与していることが示唆された。

在2个大气压下或更高的高压氧疗法会导致普遍的痉挛。但是，尚未确定这种痉挛的出现。去年，对C-FOS蛋白进行免疫染色，并在梨状皮层，顶叶，海马，齿状回和下丘中观察到表达。已知这些区域包含大量抑制性氨基酸GABA，并且怀疑GABA会参与高压氧痉挛。今年，痉挛发作两个小时后，对热休克蛋白进行免疫染色（HSP72），目的是阐明由高压氧痉挛引起的损伤部位。 HSP72的阳性发现表明该部位受到强烈的侵入性作用，并具有组织学损害。痉挛发生三个小时后，用4％甲醛溶液灌注细胞，并使用振动型制备矢状切片（50μm厚）。一级抗体（在小鼠中生产的抗HSP72抗体），继发性抗体（生物素化抗小鼠抗体）和第三级抗体（带有氧化酶的链霉亲和蛋白）用于各切片，最终使用氢元中的氢化剂和3,3'-二氨基辛氨基辛酶可视化HSP72。在痉挛后2小时，在大鼠中未观察到Hsp72蛋白的表达，但是在痉挛后24小时，在大鼠中观察到下丘中的强烈表达。据报道，下丘含有最丰富的GAD，一种产生GABA的酶。这些结果表明，由高压氧引起的痉挛的发生涉及抑制GABA，并伴随着下丘的破坏。