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黄体のアポトーシスに対する局所因子の役割と妊娠黄体形成のメカニズムに関する検討

局部因素对黄体细胞凋亡的作用及妊娠期叶黄素形成机制的研究

基本信息

批准号：
10770851
负责人：
小澤伸晃
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

排卵後卵胞は黄体へと変化しプロゲステロンを分泌するが、やがて退縮し生理が発来する。妊娠成立時には黄体は退縮せず妊娠黄体となり、初期妊娠の維持機構として中心的な役割を成している。現在黄体の退縮にはアポトーシスが関与していることが指摘されているが、今回は体外受精時に得られたヒト黄体化顆粒膜細胞を用いて黄体の形成、退縮に関与する局所因子について検討した。1.ヒト黄体化顆粒膜細胞の培養法の確立:体外受精時に得られた卵胞液から摘出後、顆粒膜細胞を分離した。洗浄後ヒト顆粒膜細胞浮遊液を作成し、細胞濃度を調整して10%FCSを含む培養液にて5%CO2インキュベーター内に無菌的に培養した。2.hCG投与による培養液中のプロゲステロン産出量の検討:体外受精前にhCGを投与されており、hCG非投与群でも顆粒膜細胞が黄体化していると考えられ、プロゲステロン分泌が認められた。一方hCGを50、500mlU/ml投与した群では、添加後1〜2時間後に非投与群に比べて約2〜3倍の分泌量となり、有意に分泌が促進された。3.ラット黄体細胞退縮過程におけるアポトーシスの関与の確認:ラット黄体細胞のprimary cultureでは黄体退縮を惹起するプロスタグランジンF2αの投与により、抽出されたDNAの電気泳動でDNAの断片化が観察された。4.培養細胞へのサイトカイン投与実験:IGF-I、EGFなどのサイトカイン投与群ではプロゲステロン分泌が亢進し、TGFβ、IL-1β、TNFαなどのサイトカイン投与では低下する傾向を示した。またin situ DNA3'-end labelling法によるアポトーシスの出現の観察ではプロゲステロンの分泌抑制と相関する可能性が示唆された。

After ovulation, the egg cells are transformed into luteal cells, which are secreted and retracted. During pregnancy, the corpus luteum shrinks, and the maintenance mechanism of early pregnancy is developed. In vitro fertilization, luteinized granular membrane cells are used to form luteal cells, which are related to luteinizing factors. 1. Establishment of culture method of luteinized granular membrane cells: in vitro fertilization, oocytes were harvested and granular membrane cells were isolated. After washing, the granular membrane cell suspension solution was prepared, and the cell concentration was adjusted to 10% FCS, and the culture solution was sterilized in 5% CO2. 2. The quantity of hCG in culture medium was studied. Before in vitro fertilization, hCG was administered and hCG was not administered. The secretion of hCG is about 2 ~ 3 times higher than that of hCG 1 ~ 2 hours after administration of hCG 50 or 500mlU/ml. 3. Identification of the relationship between luteal cell regression and DNA fragmentation: The primary culture of luteal cells induces luteal cell regression and DNA fragmentation. 4. The expression of IGF-I, EGF, IL-1β and TNFα in cultured cells increased and decreased, respectively. In situ DNA3'-end labeling method, the possibility of secretion inhibition and correlation was demonstrated.