ラット三叉神経運動核・中脳路核におけるMAPキナーゼ発現の経時的変化に関する研究

大鼠三叉神经运动核和中脑束核MAP激酶表达随时间变化的研究

• 批准号: 10771142
• 负责人: 森本 佳成
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771142/
• 关键词: in situ hybridization; 免疫組織化学染色; mitogen-activated protein kinase; 三叉神経運動核; 三叉神経中脳路核

本研究は、ラットを用いて、吸啜から離乳期を経て咀嚼に移行する過程の咀嚼筋運動支配神経に対して、MAPK(mitogen-activated protein kinase)cascadeの関与について調べることであり、免疫組織化学染色およびin situ hybridization(ISH)により、三叉神経運動核・中脳路核におけるMAPK蛋白およびそのmRNAの発現を経時的に観察し比較検討することである。現在まで、生後2,6,10・・・30,84日齢のラットの脳を摘出し、パラフィン包理してあり検体の採取は終了している。一方、ラット脳よりAGPC法でtotal RNAを採取し、Oligotex TM-dt30(Roche)を用いてmRNAを抽出した。抽出したmRNAよりFirst strand cDNA Synthesis kitを用いてcDNAの合成を行った。cDNAをtemplateとして、Polymerase Chain Reaction(PCR)により、ERK1,2、SAPKおよびp38のcDNA特異領域を増幅し、塩基対をpcDNA2 plasmidvectorに挿入後大腸菌にtransformationした。大腸菌を大量培養後plasmidを抽出しDig RNA labelling kitを用いて、digoxigenin標識RNA probeをsence,antisenceの2種類作製した。現在ERK1,2、SAPK、p38蛋白に対する免疫組織化学染色はほぼ終了しているが、今後染色結果の解析を行う予定である。また、mRNAの発現については、今後ISHを行い検討していく。

は, this study ラ ッ ト を with い て, sip か ら from breast feeding を 経 て chewing に transitional す る process の masticatory muscle movement control god 経 に し seaborne て, MAPK (mitogen - activated protein kinase)cascade <s:1> is related to に に に て て て modulation べる <s:1> とであ <e:1> て and immunohistochemical staining およびin situ Hybridization (ISH) に よ り, trigeminal god 経 sports 脳 road in nuclear, nuclear に お け る MAPK protein お よ び そ の mRNA の 発 now を 経 when に 観 examine し compare beg す 検 る こ と で あ る. Now ま で, two,6,10 · · ·,84 30 days after the birth of 齢 の ラ ッ ト の 脳 を pick out し, パ ラ フ ィ ン package Richard し て あ り 検 body の take は end し て い る. On one side, ラット脳よ ラット脳よ AGPC method でtotal RNAを is taken by を, Oligotex TM-dt30(Roche)を is extracted by を て てmRNAを and た た. Extract た たmRNAよ よ First strand cDNA Synthesis kitを to synthesize を rows った using <s:1> てcDNA を. cDNAをtemplateと <s:1> て て, Polymerase Chain Reaction(PCR)によ を, ERK1,2, SAPKおよびp38 <s:1> cDNA specific domain を increase, base pair をpcDNA2 After plasmidvectorに insert, escherichia coli にtransformation た. After large-scale culture of coliform bacteria を, the <s:1> Dig RNA labelling kitを was extracted from plasmidを. The <s:1> て and digoxigenin were used to identify the RNA probeをsence and antisence <s:1> types to prepare the <s:1> た. Now ERK1, 2, SAPK, p38 lightning protein に す seaborne る immunohistochemical staining は ほ ぼ end し て い る が line, future dyeing results の analytic を う designated で あ る. Youdaoplaceholder0, mRNA has been found to be に く て て, and in the future, ISHを will conduct <s:1> 検 to discuss て く く.