歯石形成と細胞性蛋白分解酵素の関係について

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ヒト耳下腺唾液のリン酸カルシウム結晶成長阻害活性を定量化する実験条件を検討した。反応はllmMリン酸溶液2.5mlと1mg/mlハイドロキシアパタイト懸濁液0.25mlを混合したものに,24mMカルシウム溶液0.5mlとイミダゾール緩衝液で透析した唾液0.25mlを加え開始させた。この反応液を25℃でインキュベートし,生じた沈殿物をセルロースメンブレンフィルターでろ過し,濾液中のカルシウム濃度を原子吸光分光光度計を用いて測定した。反応前後のカルシウム濃度の差をカルシウム析出量とした。1) 溶存気体をN_2で置換したカルシウム溶液,リン酸溶液,イミダゾール緩衝液を使用する,2)CaCl_2をイミダゾール緩衝液に溶解したカルシウム溶液を使用する,3)イミダゾール緩衝液の濃度は125mMとする,という条件を設定した。その結果,従来の方法に比べて測定感度を1.6倍上げ,変動係数を1/17に下げることができた。その実験系を用いて,以下の結果を得た。1. ヒト耳下腺唾液試料のリン酸カルシウム結晶成長阻害活性は,反応開始後30分まで時間依存性であり,直線的な量-反応関係が得られた。2. 25℃,30分の反応における精製したカルシウム結合タンパクの阻害活性は,唾液試料を1とした時,スタセリン:17.35,PRPs:1.23,ヒスタチン:0.11であった。3. ヒト耳下腺唾液から精製したカルシウム結合タンパクのうち,PRPs,スタセリンは30分で阻害活性が最大となったが,ヒスタチンでは90分以降から阻害活性がみられた。