酸化的ピリミジン塩基損傷を修復する新規酵素の探索

寻找修复氧化嘧啶碱基损伤的新酶

• 批准号: 10780331
• 负责人: 寺東 宏明
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780331/
• 关键词: 放射線; 活性酸素; 酸化損傷; DNA; チミングリコール; シッフ塩基; Endo III; Endo VIII

放射線の生物影響は、主として放射線が細胞内の水を励起して発生させる各種活性酸素種によるものとされている。よって放射線によるDNA損傷は主として酸化的損傷であるが、活性酸素種は呼吸等の酸素を利用する代謝過程においても副産物として発生する。よって生物はそれらの酸化的DNA損傷を修復する経路を発展させ進化してきた。本研究では、大腸菌においてピリミジンの酸化損傷であるチミングリコールの修復酵素としてEndoIIIおよびEndoVIII以外の新規修復酵素の単離を目的に、酸化的DNA損傷に対する新しい修復活性の検出を試みた。実験はまず、基質DNAとしてオリゴヌクレオチドの特定の部位に特定の損傷塩基を導入したものを作製した。EndoIIIおよびEndoVIIIはいずれも単一欠損では表現型がでず、またEndoVIIIの活性はEndoIIIの活性に隠れてしまうことから、新規修復酵素活性は更に検出が困難であると考えられた。そこで水素化ホウ素ナトリウムによる反応中間体のトラップ実験により微量な活性を検出することとした。その予備実験として、岡山大の関らがクローニングしたマウスのEndoIIIホモログにおいてEndoIIIと同様に反応中間体のトラップができるかどうかを検討した。EndoIIIについてはこれまでシッフ塩基反応中間体が水素化ホウ素ナトリウムの還元作用により共有結合化され安定な反応中間体を形成することが確認されている。実験の結果、マウスホモログも同様に安定な反応中間体を形成することがわかり、機能的にもEndoIIIのホモログであることが証明された。また実験条件検討の結果、この検出法が従来法と比較して高感度であること、また粗精製サンプル中において、ピークフラクションの特定が容易であることから最終目的であるチミングリコールに対する新規な修復酵素の検出法が確立された。

Radiation bioreactor and main radiation beam intracellular water stimulates the production of all kinds of active acids in different kinds of active acids. The main purpose of this study is to induce the production of acids such as acidified chemicals, active acid species respiration, and so on, in which the by-products of the acidified DNA are used to produce raw materials. In this paper, the biochemistry of acidified DNA is studied, and the road map is improved. The purpose of this study is to improve the activity of acidified DNA. In addition to the new specification of enzyme EndoIII EndoVIII, the purpose of this study is to improve the activity of acidified DNA. This is the first time that a specific part of a particular part has a specific part of a specific part. EndoIII EndoVIII activity has a significant impact on the performance of the table, EndoVIII activity, EndoIII activity, enzyme activity, and new specifications. In the process of hydration, the amount of water, the amount of activity. Please tell me that you are in the same position as you are in the middle of the war. You are in the same position as you are in EndoIII. You are in the same position as you are. In the EndoIII system, there is a combination of diazepam and diazepam in the system to form a body that confirms that the body is stable. The result of the experiment, the results show that the system is in the same condition as the stability control system, and the system is in the process of improving the performance of the system, and the mechanism of the EndoIII system is in good agreement with each other. In this paper, the results of the conditions, the results, the results, the

项目成果

Hiroaki Terato et al.: "Recognition of Oxidative Thymine Damage by DNA Repair Enzymes." Nucleic Acids Symposium Series. 39. 237-238 (1998)

Hiroaki Terato 等人：“DNA 修复酶对氧化胸腺嘧啶损伤的识别”。

Altaf Sarker et al.: "Cloning and Characterization of a Mouse Homologue (mNthl1) of Escherichia coli Endonuclease III." Journal of Molecular Biology. 282. 761-774 (1998)

Altaf Sarker 等人：“大肠杆菌核酸内切酶 III 的小鼠同源物 (mNthl1) 的克隆和表征。”