酵母リボゾームRNA遺伝子の増幅に寄与する組換えのホットスポットの検出

检测有助于酵母核糖体 RNA 基因扩增的重组热点

• 批准号: 10780430
• 负责人: 小林 武彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780430/
• 关键词: 酵母; リボゾームRNA遺伝子; DNA複製阻害点; 遺伝子増幅; Fob1遺伝子; 相同組み換え; ゲノムサイエンス; 老化; 分子生物学; 二本鎖切断; Fob 1遺伝子

本研究は真核細胞に普遍的に増幅して存在するリボゾームRNA反復遺伝子(rDNA)の増幅メカニズムの解明を目的に行われた。一般的に遺伝子の増幅にはその遺伝子が染色体上に整然と並ぶための組み換えのホットスポットが必須と考えられる。そこで本申請研究ではそのホットスポットとして働いていると予想されるDNA複製阻害点に着目して研究を行った。DNA複製阻害点は35SrDNAの転写終結点近傍に存在する130bpからなる配列で、35SrDNAの転写と反対方向から来るDNA複製フォークの進行のみを阻害する。昨年度までの研究の成果として、野生株で約150コピー存在するrDNAを数コピーまで減らした株をいくつか作製し、それらの株のrDNAコピー数の増幅(回復)能力を検証し、rDNAが2コピーあれば増幅が可能であることを見出した。本年度はその2コピーのrDNAに相同組み換えを利用してDNA複製阻害点(2コピーのrDNAの中間に一つ存在)をマーカー遺伝子であるURA3に置換した株を作製し、そのrDNAの増幅能力を調べた。その結果、DNA複製阻害点を持つ2コピーのrDNAの株では、45世代の培養で約80コピーまでコピー数が増加したのに対し、DNA複製阻害点をURA3に置換した株では、同じ世代培養してもその増幅は10コピー以下にとどまった(投稿準備中)。また、対照実験として行ったDNA複製阻害点のすぐ横の35S側の130bpをURA3に置換した株においては、何も置換していない元の2コピーの株とほぼ同等なコピー数の回復が見られた。以上の結果から、確かにDNA複製阻害点はrDNA中で、おそらく組み換えのホットスポットとして働き、rDNAのコピー数の増加に寄与していると結論できる。

In this study, there is a general pattern of eukaryotic cells in the presence of RNA antigens (rDNA). The purpose of this study is to understand the purpose of understanding. In general, it is necessary to make sure that the chromosomes are in order and that the chromosomes are in order. The purpose of this application is to determine whether you want to check the DNA copy blocking point. The DNA copy block point, the 35SrDNA copy write point, the 130bp copy block, the 35SrDNA copy block, the DNA copy block, the write block, and the reverse direction, respectively. In the last year, the results of the research and the wild plants showed that there was a number of rDNA, the number of rDNA in each plant, the number of rDNA, the number of rDNA in each plant, and the number of rDNA in each plant. This year, the same rDNA system makes use of the DNA copy blocking point (one of which exists in the rDNA) to make sure that the URA3 is used as a target, and that the rDNA can be used to make a difference. The results showed that the blocking point of DNA replication was about 80 percent in the 45th generation, the number of rDNA isolates in the 45th generation, the number of URA3 copies in the 45th generation, and the number of URA3 copies in the 45th generation. Do you want to know how to use the DNA copy to block the location of the 35s? 130bp? URA3? The above results are verified, and the correct DNA copy blocking points are located in the rDNA. Do not send data to the rDNA. Do not send the number of copies to the rDNA. Please add the number of copies and send them to the database.

项目成果

Takehiko KOBAYASHI: "Expansion and contraction of ribosomal DNA repeats in Saccharomyces cerevisiae : requirement of replication fork blocking (Fob1) protein and the role of RNA polymerase I"Genes and Development. 12. 3821-3830 (1998)

Takehiko KOBAYASHI：“酿酒酵母中核糖体 DNA 重复序列的扩展和收缩：复制叉阻断 (Fob1) 蛋白的要求和 RNA 聚合酶 I 的作用”基因与开发。

Takehiko KOBAYASHI: "Expansion and contraction of ribosomal DNA repeats in Saccharomyces cerevisiae: requirement of replication fork blocking (Fob 1) protein and the role of RNA polymerase" Genes and Development. 12. 3821-3830 (1998)

Takehiko KOBAYASHI：“酿酒酵母中核糖体 DNA 重复序列的扩展和收缩：复制叉阻断 (Fob 1) 蛋白的要求以及 RNA 聚合酶的作用”基因与开发。