フラミドモナスの新奇アクチン(NAP)の構造と機能

火焰单胞菌新型肌动蛋白（NAP）的结构和功能

• 批准号: 10780447
• 负责人: 箕浦 高子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780447/
• 关键词: クラミドモナス; アクチン; 分裂酵母; 形質転換; 蛍光抗体法; ダイニン; 突然変異株

クラミドモナスには骨格筋アクチンと90%のアミノ酸相同性を持つアクチンと、それとは非常に異なる配列を持つNAP(アクチンとの相同性64%)の、二種のアクチン遺伝子が存在し、互いに排他的に発現している。一生物種内に保守的なアクチンと非保守的なNAPが共存している例はこれまでに報告がない。今年度は2種のアクチンの機能的差異を検討するために、分裂酵母発現系を用いた機能解析を行った。また、他生物種におけるNAPホモログの有無を検討した。1.アクチンとNAPの酵母発現モデルの作成・解析NAP、及びアクチン遺伝子を分裂酵母の発現用ベクター(pREP1、pREP81)に導入した。NAP-pREP1で形質転換した分裂酵母株は細胞質分裂が著しく阻害され、多核の長い細胞が多く現れた。2割程度の細胞では抗NAP抗体による染色で分列環に似たリング状構造が確認され、リング内に少量の内在性アクチンが共局在した。2.他生物種におけるNAPの存在の有無近縁種のボルボックスを用い、NAP遺伝子ホモログの有無をサザンブロット法により検討した。NAPのcDNAコード領域の中間部をプローブに用い、ハイブリダイゼーションを行ったところ、反応するバンドは全く検出されなかった。徐々にストリンジェンシーを下げると、ボルボックスのアクチン遺伝子に相当するバンドが薄く検出された。ボルボックス・アクチンとNAPのアミノ酸配列相同性は65%である。実験結果はこの生物に少なくともアクチン以上にNAPと相同性を持つようなNAPホモログは存在しないことを強く示唆した。これは両種のアクチンが98%の高い相同性を持つこととは対照的である。

クラミドモナスにはbone lattice rib アクチンと90% のアミノacid homogeneity をhold つアクチンと, それとはvery にdifferent なるmatching arrangement をThe two kinds of NAP (similarity 64%), the existence of two kinds of のアクチン缝子が, and the mutual exclusive に発成している. Within the species, the conservative nanap and the non-conservative nanap coexist and the coexistence of the non-conservative nanap is reported. This year, the differences in the functions of two kinds of yeasts were analyzed and the functional analysis of fission yeast was carried out.また、Other species におけるNAPホモログの有无を検検した. 1. アクチンとNAPののモデルの Creation and analysis of NAP, and びアクチンと杝子をfission yeastの発成ベクター(pREP1, pREP81) were introduced. NAP-pREP1 can transform the fission yeast strain, inhibit cytoplasmic division, and prevent multinucleated long cells. 2 levels of cells were stained with anti-NAP antibodies, and the ring-like structure was confirmed by staining, and a small amount of internal structure was detected. 2. The existence of other biological species and the use of near speciesい, NAP remains 伝子ホモログの有无をサザンブロット法により検した. The middle part of NAP's cDNA field is used and used in the field.ゼーションを行ったところ, 濜するバンドは全く検出されなかった. Xu々にストリンジェンシーを下げると、ボルボックスThe のアクチン弝子に is quite the thin く検出された. The identity of the acid composition of ボルボックス・アクチンとNAP and のアミノノ is 65%.実験RESULTSはこのbioticに小なくともアクチン上にNAPとsimilarityをhold the つようなNAP ホモログは the existence しないことを强くshow the instigation した.これは両kind of のアクチンが98% の高いidentityをhold つこととは対毾毾毾毾毾楾毾楾楾楾毾楾毾楾毾毾楾毾毾毾毾毾毾楾毾毾毾毾毾毾毾毾through together out.

项目成果

箕浦 高子: "Highly Divergent Action Expressed in a Chlamydomonns Mutant Lacking the Contentional Action Gene" Biochemical and Biophysical Research Communications. 251. 71-76 (1998)

Takako Minoura：“缺乏竞争性作用基因的衣藻突变体中表达的高度不同的作用”《生物化学和生物物理研究通讯》251. 71-76 (1998)。