中枢神経特異的ミトコンドリア 輸送蛋白の同定と機能解析

中枢神经系统特异性线粒体转运蛋白的鉴定和功能分析

• 批准号: 10780472
• 负责人: 佐藤 康二
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine (1999)Ehime University (1998)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780472/
• 关键词: ミトコンドリア; トランスポーター; 中枢神経; 小脳; 中枢神経系

本研究に於いて,ラット脳cDNAライブラリーを用いhomology screeningを行ったところ、mitochondria tricarboxylate carrier proteinに34%のホモロジーを示す翻訳領域を含む新規遺伝子が単離された。Hydrophobicity の検索(Key&Doolittle法)により,いくつかの疎水性アミノ酸のpeakが認められ、六回ぐらい膜を貫通する膜蛋白であることが予測された。この蛋白に対する特異的抗体を作成し,更に,ラット各臓器における発現に検討を加えた。興味深いことに,この遺伝子はnorthern blot法及びwestern blot法によりmRNAレベル、蛋白レベル共に,脳にのみ特異的に発現していることがわかった。更に,in situhybridization法、および免疫組織化学法により脳内の発現を詳細に検討すると,小脳のプルキンエ細胞の周りに存在するベルグマングリア細胞に特異的な発現が認められた。免疫電顕を施行すると,予想通り,ベルグマングリアにおけるミトコンドリアの膜上に局在していることが認められた。SKNSH cellを用いた強制発現系においても発現した蛋白はミトコンドリアに移行することが認められた。今後、この新規遺伝子がコードするタンパク質の機能について解析する予定である。本蛋白の発現しているベルグマングリアは,神経細胞の移動の際の足場となる重要な細胞であり,小脳の発達に於いて重要な働きを示すことから,小脳の形態形成に重要な働きを示すことが予測される。

In this study, 34% of the cDNA fragments were screened using homology screening, and 34% of the mitochondrial tricarboxylate carrier protein was screened using new cDNA fragments. Hydrophobicity detection (Key & Doolittle method) is a method for detecting the peak of hydrophobicity and membrane protein. This protein specific antibody is produced, and in addition, the detection of each protein is discussed. The expression of mRNA and protein was detected by northern blot and western blot. In addition, in situ hybridization, immunohistochemistry and other methods, the presence of small cells in the surrounding cells was examined in detail, and cell specific findings were identified. The immune system is implemented in a way that allows the immune system to function properly. SKNSH cells are used in stress development systems, and the expression of protein is not recognized. In the future, this new specification will be used to analyze the quality of the product. The protein is expressed in the presence or absence of a protein that is important for the development of neurons in the foot field during neuronal migration, and for the development or prediction of a protein that is important for the development or morphogenesis of neurons.