出芽酵母ゴルジ体の精製法の開発及びそれらを用いた逆行小胞輸送の解析
出芽酵母ゴルジ体の精製法の開発及びそれらを用いた逆行小胞輸送の解析
芽殖酵母高尔基体纯化方法的开发及逆行囊泡运输分析
批准号：
11760055
负责人：
野田 陽一
金额：
$1.28万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 2000
中文摘要
翻译
平成11年度には,出芽酵母early Golgiに局在するt-SNAREであるSed5蛋白質にmycタグを連結して免疫沈降法によりearly Golgi画分を特異的に濃縮することに成功した.本年度はlate Golgiに局在するt-SNAREであるTlg2蛋白質にmycタグを連結して同様の方法によりlate Golgi膜画分(Tlg2 vesicle)の精製を試みた.取得されたTlg2 vesicleに存在する蛋白質をまずウエスタンブロッテイングによりSed5 vesicleの蛋白と比較した.ER-Golgi間の膜輸送に関わるv-SNAREであるSec22蛋白質とゴルジ体での蛋白質の糖鎖修飾に関わるMnn9蛋白はSed5 vesicleに多く存在し,Tlg2 vesicleにはほとんど見いだされなかった.それに対してlate Golgiで働くエンドプロテアーゼであるKex2蛋白質はTlg2 vesicleにのみ存在し,late Golgiから出芽した輸送小胞のv-SNAREであるVti1とSft1蛋白質はそのほとんどがTlg2 vesicleに存在した.これらの結果はTlg2 vesicle画分にはlate Golgi膜画分が濃縮されていることを示しており,本研究により出芽酵母のearlyとlate Golgi体画分を簡便に分離精製することが可能になった.さらにまたSed5 vesicleとTlg2 vesicleを大量に調製して存在する蛋白質を2次元電気泳動により分離して両者のプロファイルを比較した.Tlg2 vesicleにのみ存在する蛋白質5種類に注目して,N末プロテインシークエンスにより同定を試みた.うち一つはlate Golgiから液胞へ輸送される蛋白質のレセプターであるVps10/Pep1であった.他の蛋白質についてはTOF-MSによる同定を行っている.
英文摘要
平成11年度には,出芽酵母early Golgiに局在するt-SNAREであるSed5蛋白質にmycタグを連結して免疫沈降法によりearly Golgi画分を特異的に濃縮することに成功した.本年度はlate Golgiに局在するt-SNAREであるTlg2蛋白質にmycタグを連結して同様の方法によりlate Golgi膜画分(Tlg2 vesicle)の精製を試みた.取得されたTlg2 vesicleに存在する蛋白質をまずウエスタンブロッテイングによりSed5 vesicleの蛋白と比較した.ER-Golgi間の膜輸送に関わるv-SNAREであるSec22蛋白質とゴルジ体での蛋白質の糖鎖修飾に関わるMnn9蛋白はSed5 vesicleに多く存在し,Tlg2 vesicleにはほとんど見いだされなかった.それに対してlate Golgiで働くエンドプロテアーゼであるKex2蛋白質はTlg2 vesicleにのみ存在し,late Golgiから出芽した輸送小胞のv-SNAREであるVti1とSft1蛋白質はそのほとんどがTlg2 vesicleに存在した.これらの結果はTlg2 vesicle画分にはlate Golgi膜画分が濃縮されていることを示しており,本研究により出芽酵母のearlyとlate Golgi体画分を簡便に分離精製することが可能になった.さらにまたSed5 vesicleとTlg2 vesicleを大量に調製して存在する蛋白質を2次元電気泳動により分離して両者のプロファイルを比較した.Tlg2 vesicleにのみ存在する蛋白質5種類に注目して,N末プロテインシークエンスにより同定を試みた.うち一つはlate Golgiから液胞へ輸送される蛋白質のレセプターであるVps10/Pep1であった.他の蛋白質についてはTOF-MSによる同定を行っている.
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Jung-Hwa Cho,Yoichi Noda and Koji Yoda: "Proteins in the early Golgi compartment of Saccharomyces cerevisiae immunoisolated by Sed5p"FERS Letters. (in press). (2000)
Jung-Hwa Cho、Yoichi Noda 和 Koji Yoda：“通过 Sed5p 免疫分离的酿酒酵母早期高尔基体中的蛋白质”FERS 快报。
Jung-Hwa Cho、Yoichi Noda 和 Koji Yoda：“通过 Sed5p 免疫分离的酿酒酵母早期高尔基体中的蛋白质”FERS 快报。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
K.Yoda,T.Kawada,C.Kaibara,A.Fujie,M.Abe,H.Hashimoto,J.Shimizu,N.Tomishige,Y.Noda,and M.Yamasaki: "Defect in cell wall integrity of the yeast Saccharomyces cerevisiae caused by a mutation of the GDP-mannose pyrophosphorylase gene VIG9"Bioscience, Biotechno
K.Yoda、T.Kawada、C.Kaibara、A.Fujie、M.Abe、H.Hashimoto、J.Shimizu、N.Tomishige、Y.Noda 和 M.Yamasaki：“酵母细胞壁完整性缺陷
K.Yoda、T.Kawada、C.Kaibara、A.Fujie、M.Abe、H.Hashimoto、J.Shimizu、N.Tomishige、Y.Noda 和 M.Yamasaki：“酵母细胞壁完整性缺陷
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
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通讯作者：
K.Yoda and Y.Noda: "Vesicular transport and the Golgi apparatus in yeast"Journal of Bioscience and Bioengineering. 91(1). 1-11 (2001)
K.Yoda 和 Y.Noda：“酵母中的囊泡运输和高尔基体”生物科学与生物工程杂志。
K.Yoda 和 Y.Noda：“酵母中的囊泡运输和高尔基体”生物科学与生物工程杂志。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
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通讯作者：
J-H.Cho,Y.Noda and K.Yoda: "Proteins in the early Golgi compartment of Saccharomyces cerevisiae immunoisolated by Sed5p"FEBS Letters. 469. 151-154 (2000)
J-H.Cho、Y.Noda 和 K.Yoda：“通过 Sed5p 免疫分离的酿酒酵母早期高尔基体区室中的蛋白质”FEBS 快报。
J-H.Cho、Y.Noda 和 K.Yoda：“通过 Sed5p 免疫分离的酿酒酵母早期高尔基体区室中的蛋白质”FEBS 快报。
DOI：
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期刊：
影响因子：
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作者：
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通讯作者：
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