膠原病患者における抗クロモ抗体(p25)及び、p27抗体検出のELISA法確立

胶原病患者抗色素抗体（p25）和p27抗体ELISA检测方法的建立

• 批准号: 11770457
• 负责人: 岩井 昭樹
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770457/
• 关键词: 抗セントロメア抗体; 抗クロモ抗体; ELISA; p25; HP1^<HSα>

軽症型強皮症の血清学的マーカーとされる抗セントロメア抗体(ACA)を用いてセントロメア蛋白の構造と機能の解析、疾患特異性の検討を行ってきた。その過程で、約半数のACA陽性患者血清中にのみ共存する抗体が認識するヘテロクロマチン結合蛋白p25(Hp1^<HSa>)をクローニングした。その抗体は抗クロモ抗体と呼ばれ(p23およびp25に対する自己抗体)、大部分の抗p25抗体はクロモドメインとクロモシャドウドメインと呼ばれる種において保存されている領域を認識し、同抗体陽性患者はACA陽性患者の中で臨床的にシェーグレン症候群やエリテマトーデスの特徴を併せ持つ一つのサブセットを形成する。クロモ抗原p25の全長cDNAを用いての発現蛋白によりELISAの系を確立し、同時に多検体の解析を定量的に行うことを目的として実験を進めた結果、以下の事項が判明した。1)p25(Hp1^<HSα>)の大腸菌におけるリコンビナント蛋白の発現精製は、全長のリコンビナント蛋白においては非常に蛋白分解を受けやすく、2)発現ベクターの種類、大腸菌培養条件の変更、各種プロテアーゼインヒビターの使用等の工夫によっても克服困難であった。今後ELISAの実用化に向けて二つのメジャーエピトープであるクロモドメインとクロモシャドウドメイン部分蛋白を独立に発現精製させ、それらの混合蛋白でELISAを行うことも一方ではないかと思われる。

Serological characterization of scleroderma and the use of anti-scleroderma antibodies (ACA) to characterize the structure and function of scleroderma proteins. About half of the ACA positive patients had blue shift antibodies in their sera, which were recognized by the protein p25(Hp1<HSa>). Antibodies include anti-p23 antibodies and anti-p25 antibodies, most anti-p25 antibodies are recognized as anti-p25 antibodies, and anti-p25 antibodies are recognized as anti-p25 antibodies. The ELISA system for the detection of the full-length cDNA of p25 antigen was established and the quantitative analysis of the polypeptide was carried out. 1) The development and purification of p25(Hp1^&lt;HSα&gt;) Escherichia coli protein, the full length Escherichia coli protein, and the degradation of protein; 2) The development of different types of Escherichia coli, the change of culture conditions of Escherichia coli, and the use of various types of Escherichia coli protein. In the future, the application of ELISA will be carried out in two ways: independent development and purification of partial proteins, and mixed protein ELISA.