組織特異的プロモーターを用いに軟骨肉腫の遺伝子治療法の確立

使用组织特异性启动子建立软骨肉瘤基因治疗

• 批准号: 11770798
• 负责人: 名井 陽
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770798/
• 关键词: 軟骨肉腫; 遺伝子治療; XI型コラーゲン; 組織特異的プロモーター; チミジンキナーゼ; ガンシクロビル; GFP

1.担癌ヌードマウスの作成ヒト粘液型軟骨肉腫より樹立した細胞株HCS-TG/C3、HCS-TG/E2は、その後の調査でヌードマウスでの造腫瘍性が弱くin vivoでの遺伝子治療実験には不適当と考え、これらのクローンの親株であるHCS-TG細胞をヌードマウスに移植し皮下腫瘍を作成した。この腫瘍はヌードマウスで継代可能であった。2.CMVプロモーターにより発現制御されるHerpes Simplex Virus Tymidine Kinase(HSV-TK)遺伝子ベクターのin vivo electroporationによる腫瘍内導入遺伝子の細胞内移行の至適条件を決定するため腫瘍が直径5cm程度に達したときに、FITC標識オリゴヌクレオチドを腫瘍内に5箇所注射し、それぞれの周囲に、6本の針電極を組み合わせ簡便に3方向から電圧をかけられる電極を挿入しelectroporationを行った。翌日、腫瘍組織を摘出し凍結切片を作成して蛍光顕微鏡下に細胞内のFITCラベルを観察した。FITCラベルオリゴヌクレオチドは核内に局在しており、その導入が確認された。また同時にelectroporation の至適条件を決定した。現在、CMVプロモーター制御のHSV-TKとクラゲ蛍光蛋白GFPの融合蛋白の遺伝子をヌードマウス腫瘍に注射、electroporationを行い、腫瘍内での蛋白発現をGFPの蛍光を観察することにより経時的に解析した。3.軟骨特異的Xl型コラーゲンalpha1鎖のプロモーターを含むHSV-TK遺伝子発現ベクターの作成PNASSβをバックボーンにColXIa1プロモーターおよび第1イントロン、HSV-TK/GFP fusion geneの挿入を試みたが、XI型コラーゲン発現細胞において正しい発現を示すクローンが得られなかったため、別の発現ベクターに対しプロモーターを入れ替えてコンストラクションを行った。

1. The study of cell lines HCS-TG/C3, HCS-TG/E2 and HCS-TG/E3 after establishment of mucoid chondrosarcoma cells was carried out. This is the first time I've ever seen a woman. 2. The optimal conditions for the intracellular migration of the CMV vector in vivo electroporation were determined. The diameter of the tumor was 5 cm. The FITC marker was used to detect the expression of Herpes Simplex Virus Tymidine Kinase(HSV-TK). 6. The needle electrode assembly is simple and convenient. The electrode assembly is simple and convenient in 3 directions. The next day, the tumor tissue was extracted and frozen sections were prepared. The FITC activity in the cells was observed under a microscope. The FITC is responsible for the identification of nuclear sites and their introduction. The optimum conditions for electroporation are determined. Now, the HSV-TK and GFP fusion protein gene of CMV protein control are analyzed by injection, electroporation, protein expression in tumor and GFP fluorescence detection. 3. Cartilage-specific X1-type alpha1-type fusion gene expression including HSV-TK gene expression and PNASSβ expression, ColXIa1-type fusion gene expression and first expression, HSV-TK/GFP fusion gene expression and X1-type fusion gene expression.

项目成果

Araki N.,Myoui A.et al.: "Intraoperative extracorporeal autogenous irradiated bone grafts in tumor surgery"Clinical orthopaedics.. 368. 196-206 (1999)

Araki N.，Myoui A.等：“肿瘤手术中的术中体外自体辐照骨移植”临床骨科.. 368. 196-206 (1999)

T.Nakase: "Immunohistochemical detection of cathepsin D,K, and Lin the process of endochondral ossification in the human"Histochem cell Biol. 114・1. 21-27 (2000)

T.Nakase：“人体软骨内骨化过程中组织蛋白酶 D、K 和 Lin 的免疫组织化学检测”Histochem cell Biol 114・1（2000）。

T.Nakase: "Involvement of multinucleated giant cells synthesizing cathepsin K in calcified tendinitis of the rotator cuff tendons"Rheumatology. 39・10. 1074-1077 (2000)

T.Nakase：“合成组织蛋白酶 K 的多核巨细胞参与肩袖肌腱的钙化肌腱炎”风湿病学 39・10（2000）。

N.Hashimoto: "Am J Surg Pathol"Detection of SYT-SSX Fusion Gene in Peripheral Blood from a Patient with Synovial Sarcoma.

N.Hashimoto：《Am J Surg Pathol》滑膜肉瘤患者外周血中 SYT-SSX 融合基因的检测。

Yoshikawa H.,Myoui A.et al.: "Bone metastases from soft tissue sarcomas"Seminars in musculoskeletal radiology. 3. 183-189 (1999)

Yoshikawa H.，Myoui A.等人：“软组织肉瘤的骨转移”肌肉骨骼放射学研讨会。