内因性阻害物質を分子プローブとした活性型フェノールオキシダーゼの機能構造解析

使用内源抑制剂作为分子探针的活性酚氧化酶的功能结构分析

基本信息

批准号：
12760078
负责人：
佐藤孝
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Saga University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

イエバエ蛹より単離されたフェノールオキシダーゼインヒビター(POI)は、昆虫の変態・生体防御に深く関わると考えられるフェノールオキシダーゼに対する非常に強力な内因性阻害ペプチドである。本研究においては、強い自己酸化活性を有する事からその活性型酵素の単離精製が困難であるため、蛋白質レベルでの研究が遅れている活性型フェノールオキシダーゼについて、POIを多機能プローブとして用いる事によりその詳細な知見を得る事を目的として行なった。まず、POIをプローブとして作成したアフィニティーカラムにより、新たなフェノールオキシダーゼ様活性を有する蛋白質複合体の存在を見出した。本複合体は、幼虫から蛹への形態変化に沿って発現し、その活性の発現にはカルシウム等の二価イオンの存在が必須であり、これまでに単離精製されているフェノールオキシダーゼとは性質が大きく異なっていた[投稿準備中]。現在その構造を決定中である。また、本酵素を阻害する蛋白質として新たにペプチド性のPOIとは異なる約20kDaの蛋白質を新たに見出し、これが分子単体としての阻害強度はPOIに若干劣るが、イエバエ蛹抽出液に占めるフェノールオキシダーゼ阻害活性の主要な成分の一つである事を見出した[投稿中]。これらの結果は、少なくともイエバエにおけるフェノールオキシダーゼ及びその活性制御が、フェノールオキシダーゼとPOIよる一次元的な物ではなく、これまで知られていない複数の蛋白質が複雑に相互作用し行われている事を示唆している。

从家蝇中分离出的苯酚氧化酶抑制剂（POI）是极有效的苯酚氧化酶内源性抑制剂，被认为与昆虫的变态和生物防御剂相关。在这项研究中，由于很难分离和纯化活性酶，因为它具有强大的自氧化活性，因此很难分离和纯化它。因此，目的是通过将POI用作多功能探针来获得活性苯酚氧化酶的详细知识，这些知识已延迟了蛋白质水平的研究。首先，通过使用POI作为探针制成的亲和力柱发现具有苯酚氧化酶样活性的新蛋白质复合物。该复合物沿着从幼虫到p的形态学变化表达，并且存在二价离子（例如钙）对于其活性至关重要，其特性与先前隔离和纯化的苯酚氧化酶[正在制备中]显着不同。该结构目前正在确定。此外，新发现的一种抑制这种酶的新蛋白质的蛋白质大约为20 kDa，与肽POI不同，尽管该分子作为单个分子的抑制强度略微较低，但它已经发现了poptains in poptim in poff pof的poi的poi。这些结果表明，苯酚氧化酶及其活性调节不是苯酚氧化酶和POI的一维，而是以前未知的蛋白质以复杂的方式相互作用。