内耳血管条上皮細胞(辺縁細胞)に発現しているユニークな体積依存性Cl^-チャネル

在内耳纹血管上皮细胞（边缘细胞）中表达的独特的体积依赖性 Cl^-通道

• 批准号: 12770020
• 负责人: 安藤 元紀
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kochi Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770020/
• 关键词: 血管条; 辺縁細胞; Cl^-チャネル; ClC-Kl]; single cell RT-PCR; ClC-K1

申請者により,血管条辺縁細胞の基底側膜には細胞体積と関連するCl^-チャネルが豊富に発現しており,このCl^-チャネルが内耳機能の発現に不可欠であることが明らかになっている.イオン選択性からこのチャネルがClC-superfamilyの一員であると示唆されたが,細胞体積との関連が報告されているClC-2とClC-3のどちらの電気生理学的特徴も,辺縁細胞のCl^-チャネルのものとは一致しない.そこで本研究費(初年度)により、辺縁細胞に局在しているCl^-チャネルm-RNAの同定(single-cell RT-PCR法による)を行なったところ,血管条組織レベルではClC-superfamilyのうちClC-2,-3,-5,-Klのm-RNAの発現を確認し,ClC-Klについてはsingle-cell RT-PCRを行い、辺縁細胞の単一細胞レベルでの発現を証明した。そこで,m-RNAレベルで血管条に発現が確認されたClC-2,-3,-5,-Klついて、免疫組織化学的手法によりその局在を明らかにすることを試みた。ClC-Klについては,特異的な抗体が入手困難であったので、チャネルタンパクに特異的なアミノ酸配列の合成オリゴペプチドに対するウサギポリクローナル抗体を作製して検討した.その結果,血管条組織レベルでClC-2,-3,K1の陽性反応を得た.ClC-5については現在検討中である.ClC-2,-3については,辺縁細胞においてClC-Klとの共発現の可能性があるため,単離血管条細胞を用いて再検討を始めている.以上の結果より,血管条辺縁細胞にClC-superfamilyの一部が発現していることが判明した.今後,遺伝性難聴を含めたの内耳病態とCl^-チャネルとの関わりを解明していく必要がある.

The applicant is responsible for the development of cell volume in the basolateral membrane of vascular striated cells, and for the development of cell volume in the basolateral membrane of vascular striated cells. ClC-2 and ClC-3 were identified as members of ClC-superfamily by electrophysiological characteristics of ClC-2 and ClC-3. In this study, we confirmed the presence of m-RNA in the ClC-superfamily by single-cell RT-PCR, and the presence of m-RNA in the ClC-superfamily by single-cell RT-PCR. In addition, the detection of m-RNA in vascular strips was confirmed by ClC-2,-3,-5,-Kl and immunohistochemical methods. ClC-Kl antibody is difficult to obtain, and it is difficult to produce specific antibody. ClC-2,-3,K1 positive reaction was detected in vascular strip tissue.ClC-5 positive reaction was detected in the present study.ClC-2,-3 positive reaction was detected in vascular strip tissue.ClC-2,-3 positive reaction was detected in vascular strip tissue. ClC-2, -3 positive reaction was detected in vascular strip tissue. As a result, a part of ClC-superfamily in vascular striated cells appeared. From now on, the genetic difficulties include the inner ear disease and the Cl^-.

项目成果

Takeuchi, S.: "Mechanism generating endocochlear potential : role played by intermediate cells in stria vascularis"Biophysical Journal. 79. 2572-2582 (2000)

Takeuchi, S.：“产生耳蜗内电位的机制：中间细胞在血管纹中发挥的作用”生物物理学杂志。

Takeuchi S: "Three-dimensional and ultrastructural relationships between intermediate cells and capillaries in the gerbil stria vascularis"Hear Res. 155. 103-112 (2001)

Takeuchi S：“沙鼠血管纹中中间细胞和毛细血管之间的三维和超微结构关系”听到研究。

Ando M.: "mRNA encoding 'ClC-K1', a kidney Cl^--channel' is expressed in marginal cells of the stria vascularis of rat cochlea : its possible contribution to Cl^- currents."Neuroscience Letters. 284. 171-174 (2000)

Ando M.：“编码‘ClC-K1’（肾 Cl^- 通道）的 mRNA 在大鼠耳蜗血管纹边缘细胞中表达：它对 Cl^- 电流的可能贡献。”《神经科学快报》。