組み換えNF-BウイルスによるヒトKrabbe病治療法開発の研究

重组NF-B病毒治疗人类克拉伯病的研究进展

• 批准号: 12770404
• 负责人: 菅野 啓一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770404/
• 关键词: 組み換えNF-Bウイルス; Krabbe病; twitcherマウス; オリゴデンドロサイト

本年度はtwitcherマウスにおける脳内のNF-κB活性化動態の検討を行った。胎生20日、生後0日、1週、2週、3週、4週目のtwitcherマウスの全脳を摘出した。摘出に先立ち2%パラホルムアルデヒドにて灌流固定を行った。その後一晩、同じ固定液にて浸潤固定を行った。10,続いて20,30%の蔗糖液にてCryoprotectionを行い、OCT compound中で液体窒素で凍結ブロックを作成した。凍結切片を作成後、免疫蛍光染色を行った。用いた抗体は抗ニューロフィラメント抗体、抗MBP抗体、抗GFAP抗体、抗NF-κBを用いた。希釈倍率は100倍で行った。現時点ではまだpreliminaryな結果しか得られていないがMBP陽性細胞、すなわちオリゴデンドロサイトにおいてもNF-κBの発現が認められた。時間的変化では生後0日に最も高く発現が認められた。しかしその後の週数ではオロゴデンドロサイトがアポトーシスにて脱落してゆくためオリゴデンドロサイトそのものの数が低下し判定が難しく今後の検討を加える必要性を感じた。ニューロフィラメント陽性細胞、すなわち神経細胞でもやはりNF-κBは発現していた。しかしながら週齢による変動は少なくとも染色性で見る限り認められなかった。GFAP陽性細胞すなわちアストロサイトでも神経細胞と同様の所見であった。以上の結果よりすると少なくともNF-κBの発現パターンより考えるとtwitcherマウスにおいては病変はオリゴデンドロサイトに限られている様に思われた。今後はそれぞれの細胞の純培養を行い細胞免疫染色ばかりでなく、ウェスタンブロット法やRT-PCR法などを行ってより発現パターンを定量的に行う予定である。

This year, the dynamics of NF-κB activation in the twitcher matrix were discussed. 20 days after birth, 0 days, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks after birth The first two percent of the time, the second percent of the time, the third percent of the time, the fourth percent of the time, the After a while, the same fixative solution was used to fix it. 10, 20,30% sucrose solution for Cryoprotection, OCT compound for liquid Cryoprotection Frozen sections were prepared and immunostained. Antibodies such as anti-MBP antibody, anti-GFAP antibody and anti-NF-κB antibody were used. I hope the magnification is 100 times. At this point, the preliminary results showed that MBP positive cells and NF-κB expression were identified. Time changes after birth 0 days high to recognize In the weeks after the launch, the number of Orogamondero service units will fall off due to lack of support. The number of Orogamondero service units will be low. It will be difficult to determine. We feel the need to increase future discussions. NF-κB is expressed in both positive and negative neurons. The color of the color is not obvious. GFAP positive cells are the same as those seen in the brain. The above results show that NF-κB can be detected by twitcher and can be detected by other methods. In the future, the pure culture of these cells will be carried out by cell immunostaining, RT-PCR and quantitative analysis.