5-HT_<2A>受容体共役情報伝達系を介するβ_1アドレナリン受容体遺伝子発現抑制機構

5-HT_<2A>受体偶联信号转导系统介导的β_1肾上腺素受体基因表达抑制机制

• 批准号: 12770551
• 负责人: 大川 義則
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770551/
• 关键词: β_1アドレナリン受容体遺伝子; 5-HT_<2A>受容体; プロテインキナーゼC; 転写抑制; CRE類似配列; β1アドレナリン受容体遺伝子; 5-HT2A受容体; CREB

1)平成12年度の実験から、PKCを介したβ_1受容体転写抑制には、翻訳開始点の5'上流-403/-340の領域が関与しており、-352/-345に存在するCRE類似配列が重要であることが明らかになった。2)CRE類似配列を含む領域(-364/-337)をプローブに用いたゲルシフトアッセイから、CRE類似配列に結合する転写因子はCREBであることが示唆された。この結果は精製ヒトCREBを用いた実験からも支持された。3)抗CREB抗体存在下にゲルシフトアッセイを行うと、スーパーシフトが観察され、CRE類似配列に結合する転写因子がCREBであることが明らかになった。4)SY5Y細胞核抽出物を用いたDNase Iフットプリンティングアッセイの結果、CRE類似配列に結合する転写因子はCREBであった。この時、CRE類似配列近傍に結合し、CREBと強調的に作用すると考えられる転写因子は検出できなかった。5)5-HT_<2A>受容体刺激に続くPKC活性化により、リン酸化CREBが増加するものと思われる。一般にCREBのリン酸化は、CREBのCREへの結合には影響を及ぼさないが、リン酸化CREBと他の転写(調節)因子との相互作用が高まり、結果的に遺伝子転写は促進する。しかし今回の実験では、PKC活性化に伴いβ_1受容体遺伝子は、むしろ、抑制された。今回の実験では、CRE類似配列近傍に結合するCREBと協調的に作用する転写因子は見出せなかった。しかし、β_1受容体遺伝子の基本転写活性には、CRE類似配列およびそれより5'側の配列が必要である。従って、今回のDNase Iフットプリンティングアッセイの条件下では検出できなかった可能性があるが、CREBと協調的に作用する転写因子が、PKCによるリン酸化を受け、CREBとの結合(直接あるいは間接的な結合)が抑制され、結果的にβ_1受容体遺伝子転写活性が減少した可能性が考えられた。

1）2000年的实验表明，平移起始点-403/-340的区域5'参与了PKC介导的β_1受体转录抑制，并且存在于-352/-345的CRE样序列很重要。 2）使用包含类似CRE的序列（-364/-337）的区域的凝胶移位分析，因为探针表明CREB是与CRE样序列结合的转录因子。使用纯化的人类Creb的实验也支持了这一结果。 3）当在存在抗CREB抗体的情况下进行凝胶偏移测定时，观察到超移升，表明CREB是与CRE样序列结合的转录因子。 4）使用SY5Y细胞核提取物的DNase I足迹测定表明，CREB是与CRE样序列结合的转录因子。目前，无法检测到与CRE样序列的附近结合的转录因子，并且被认为可以在CREB上重点作用。 5）刺激5-HT_ <2A>受体后的PKC激活似乎会增加磷酸化的CREB。 CREB的磷酸化通常不会影响CREB与CRE的结合，而是会增加磷酸化的CREB与其他转录（调节）因子之间的相互作用，从而导致基因转录增加。但是，在该实验中，由于PKC激活，β_1受体基因被抑制了。在本实验中，未发现转录因子与CREB结合与CRE样序列附近的结合起作用。但是，对于β_1受体基因的基本转录活性，需要类似于CRE的序列和序列5'侧面。因此，尽管在当前的DNase I足迹测定的条件下可能未检测到它，但人们认为与CREB一起起作用的转录因子会通过PKC经历磷酸化，从而抑制了CREB的结合（直接或间接结合），从而导致β_1受体基因转录的降低。

项目成果

松井宏晃: "セロトニン受容体研究の進歩と臨床"聖マリアンナ医科大学雑誌. 29・3. 155-168 (2001)

Hiroaki Matsui：“血清素受体研究的进展和临床进展”圣玛丽安娜大学医学院杂志29・3（2001）。

Tomoko Hiroi: "Identification and characterization of the human serotonin-4 receptor gene promoter"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 289・2. 337-344 (2001)

Hiroi Tomoko：“人血清素-4受体基因启动子的鉴定和表征”Biochem.Biophys. 289·344（2001）。