エストロゲンレセプターを標的とするユビキチンリガーゼのクローニング

靶向雌激素受体的泛素连接酶的克隆

• 批准号: 12770673
• 负责人: 緒方 晴樹
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770673/
• 关键词: エストロゲンレセプター; タンパク質分解; BRCA1; ユビキチンリガーゼ; BARD1; RINGフィンガー; エストロゲンレセプタ

1.ERαの転写活性を抑制することが報告されている家族性乳癌の原因遺伝子BRCA1のユビキチンリガーゼ活性の解析。BRCA1とBARD1がRINGヘテロダイマー型ユビキチンリガーゼを形成すること、さらに従来報告されている家族性乳癌におけるBRCA1のミスセンス変異がユビキチンリガーゼ活性を完全に死活させることを発見した(J.Biol.Chem,276:14537-,2001)。2.ERαのユビキチン依存性タンパク質分解に影響を与える細胞内修飾の解析。ERαはエストロゲン(E2)刺激にてユビキチン依存性に分解されることが報告されているが、これは細胞によって異なることが判明した。293T細胞を用いた遺伝子移入による一過性発現の系では、ERαタンパク質はE2によって著明に安定化し、ERE (estrogen response element)によって不安定となり、この際のタンパク質分解は26Sプロテアソーム依存性であった。3.以上よりE2存在下および非存在下にてERαを基質としたBRCA1-BARD1のユビキチンリガーゼ活性を解析したが、BRCA1-BARD1はERαをユビキチン化しえなかった。4.BRCA1-BARD1のRING finger domainと相同性のある他のRING finger遺伝子をクローニングし、そのユビキチンリガーゼ活性を解析した。その結果Rad18AとEfp (Estrogen responsive finger protein)がユビキチンリガーゼ活性を有することが判明した。

1. Analysis of ER α gene expression inhibition activity in familial breast cancer. BRCA1 and BARD1 have been reported to have different levels of BRCA1 activity in familial breast cancer (J. Biol. Chem, 276:14537-,2001). 2. Analysis of ER α-dependent cytokinesis effects and intracellular modifications. ERα is the most important factor in determining the response time of a cell to a stimulus. 293T cells are transiently present during gene migration, and the ERα response element (ERE) is stable, unstable, and dependent on the 26S response element. 3. BRCA1-BARD1 is the first to analyze ER α in the presence and absence of E2. 4. BRCA1-BARD1's RING finger domain and identity analysis Rad18A and Efp (Estrogen responsive finger protein) were found to be active.

项目成果

Rintaro Hashizume: "The RING heterodimer BRCA1-BARD1 is a ubiquitin ligase inactivated by a breast cancer-derived mutation"Journal of Biological Chemistry. 276(18). 14537-14540 (2001)

Rintaro Hashizume：“RING 异二聚体 BRCA1-BARD1 是一种因乳腺癌衍生突变而失活的泛素连接酶”《生物化学杂志》。

Rintaro Hashizume: "The RING heterodimer BRCA1-BARD1 is an ubiquitin ligase inactivated by a breast cancer-derived mutation"Journal of Biological Chemistry. (In Press). (2001)

Rintaro Hashizume：“RING 异二聚体 BRCA1-BARD1 是一种因乳腺癌衍生突变而失活的泛素连接酶”《生物化学杂志》。