クローン化したウシ乳腺上皮細胞へのGH遺伝子導入によるカゼイン生成能促進

克隆牛乳腺上皮细胞导入GH基因提高酪蛋白生产能力

• 批准号: 13876060
• 负责人: 加藤 和雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13876060/
• 关键词: ウシ乳腺細胞; GH; ATP; 脂肪酸; カルシウムイオン; トリグリセリド; カゼイン; 遺伝子発現; 乳腺上皮細胞

[本研究の目的]1.ウシ乳腺腺房細胞を株化し、腺房細胞のGH刺激効果を検出するシステムを確立し、反応性を検討する。2.腺房細胞における脂肪蓄積とGH受容体やカゼインなどの関連遺伝子発現に及ぼす脂肪酸の影響を検討する。3.分泌作用機構に不可欠な細胞内情報伝達物質である細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]c)動態を測定する。4.GH受容体やカゼイン遺伝子発現を刺激する脂肪酸の細胞内調節機構とその形質転換の可能性を検討する。[結果]1.GHおよび脂肪酸は、ウシ乳腺腺房細胞に対して、直接的な刺激効果を示した。2.GH刺激はH^+ effluxを抑制したが、ATP刺激はeffluxを増加した。[Ca^<2+>]cの変化も、H^+ effluxと同様な変化であった。また、Lactogenic hormonesの処理は、GHおよびATP刺激反応を逆転させたGHやATP刺激時の[Ca^<2+>]c増加は、細胞外からのinfluxの増加によるものと推察された。3.オクタン酸や長鎖脂肪酸刺激はTG蓄積とCD36 mRNA発現を濃度依存性に促進した。Leptin mRNA発現はdroplets形成と関係している可能性が考えられた。TG合成を刺激したオクタン酸や長鎖脂肪酸刺激は[Ca^<2+>]cを増加した。この増加は、細胞外からのinfluxの増加によるものではない可能性が示された。4.長鎖脂肪酸刺激は、TG蓄積のみならず、CaseinやGH受容体mRNA発現をも刺激した。[Ca^<2+>]cや[cAMP]c動態がCasein合成に関与することが報告されている(Duncan and Burgoyne,1996;Clegg et al.,2001)ことから、今回用いた脂肪酸がどのような細胞内情報伝達系を介してTGやCasein合成を調節しているのか、これから解明して行かねばならない。

[Objective of this study]1. To investigate the growth and development of mammary gland cells. 2. The effects of fat accumulation in glandular cells, the development of GH receptors and related genes, and the effects of omega-3 fatty acids are discussed. 3. Secretion mechanisms are essential for the determination of intracellular Ca^<2+> concentrations ([Ca^<2+>]c). 4. To investigate the possibility of cellular regulation of fatty acids by GH receptor and gene production. [Results] 1. GH and fatty acids were found to stimulate breast cells directly. 2. GH stimulation inhibited H^+ efflux, ATP stimulation increased efflux. [Ca^<2+>]c The treatment of Lactogenic hormones, GH and ATP stimulation,[Ca^<2+>]c increase, extracellular influx and increase were investigated. 3. TG accumulation and CD36 mRNA expression were promoted by the stimulation of fatty acids and long-chain fatty acids in a concentration-dependent manner. Leptin mRNA expression is related to droplets formation. TG synthesis stimulated by long chain fatty acid increased The possibility of this increase in extracellular flux and increase in extracellular flux is shown. 4. Long-chain fatty acids stimulate TG accumulation and Casein GH receptor mRNA expression. [Ca^a b c [cAMP]c dynamics are reported in relation to Casein synthesis (Duncan and Burgoyne,1996;Clegg et al., 2001) The fatty acids used today are regulated by intracellular signaling systems that mediate TG Casein synthesis.

项目成果

Kitade, K.: "Expression and localization of carbonic anhydrase VI in bovine mammary gland and secretion in milk"Comparative Biochemistry and Physiology. 134. 349-354 (2003)

Kitade, K.：“碳酸酐酶 VI 在牛乳腺中的表达和定位以及牛奶中的分泌”比较生物化学和生理学。

Katoh, K. et al.: "Effects of adenosine 5'-triphosphate and growth hormone on cellular H^+ transport and calcium ion concentrations in cloned bovine mammary epithelial cells"Journal of Endocrinology. 169. 381-388 (2001)

Katoh，K.等人：“5-三磷酸腺苷和生长激素对克隆牛乳腺上皮细胞中细胞H + 转运和钙离子浓度的影响”内分泌学杂志。