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神経内分泌系におけるペプチド性情報分子の超高感度定量法の開発

开发用于量化神经内分泌系统中肽信息分子的超灵敏方法

基本信息

批准号：
15657015
负责人：
浦野明央
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

サケ科魚類の回遊制御の分子機構を明らかにするためには,神経内分泌系に属する特定の神経核および神経下垂体のそれぞれに含まれるペプチド性の神経ホルモンの量を測定し,その動態を明らかにする必要がある.そのための超高感度アッセイ系を開発することを目的として研究を進めた.まずアッセイ系の開発を目指したペプチド性神経ホルモンは,サケ生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)である.採用したアッセイ法の原理は,EIA法における発色剤の反応部分に分子生物学の研究でよく用いられるβガラクトシダーゼ(βGAL)の化学発光を利用することであった.アッセイ法の手順は,1)IgG抗体をコートしたマイクロプレートを用意する.2)マイクロプレート中で,標識ホルモンとしてビオチン化GnRHを用い,GnRH抗体存在下に,スタンダードあるいは試料中のsGnRHとの競合反応を行わせる.3)固層化されたGnRH抗体-ビオチン化GnRHの量を,アビジン-βGAL複合体を用いて定量する.検定は,モルキュラープローブ社のF-2905キットを用い,化学発光をフォトンカウンティングにより行う.今年度は,前年度のビオチン化GnRHの合成とそれに続くアビジン-βGAL複合体との結合の確認実験を踏まえて,フォトンカウンティングに適した基質の選択,および抗体のチェックを行い,10amol(amol=10^<-18>mol)の感度でスタンダードカーブを作成することができることを確認できた.しかし,感度を高めるためには化学発光の検出に時間をかける必要があり,必ずしも実用的といえる段階にまでは至らなかった.今後,手持ちの抗体より選択制の高い特異的なよい抗体を入手し,方法を改善する必要がある.

The molecular mechanism of migratory control in fish is clearly defined. It is necessary to determine the amount of specific neuronuclei and neuropendules belonging to the neuroendocrine system, including the dynamics of migratory control in fish. The goal is to improve the sensitivity of the system. The development of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) is indicated by the development of gonadotropin-releasing hormone (GnRH). Based on the principle of EIA method, the chemical emission of βGAL was studied in molecular biology. The procedure of the method is as follows: 1)IgG antibody is detected in the sample; 2) GnRH antibody is detected in the sample; 3) GnRH antibody is immobilized in the sample; GnRH-β GAL complex is quantified in the sample; 4) GnRH antibody is detected in the sample; 5) GnRH antibody is detected in the sample; 6) GnRH-βGAL complex is quantified in the sample. The F-2905 of the company was used in the chemical light industry. This year, the synthesis of GnRH and the identification of the binding of GnRH-βGAL complex in the previous year were carried out, and the selection of appropriate substrates was carried out. The sensitivity of GnRH-β GAL complex was determined by 10 mol (amo =10^<-18>mol). The sensitivity is high, the time for chemical emission is necessary, and the level of application is necessary. In the future, it is necessary to improve the method of antibody selection and production with high specificity.