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ダニ喘息の経口ワクチンを目指したプロバイオティクスの創生

研制用于蜱哮喘口服疫苗的益生菌

基本信息

批准号：
15658025
负责人：
山下光雄
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

アレルゲン或いはペプチド遺伝子を組み込んだ食品微生物を開発し、それ自体またはそれら微生物が生み出す醗酵産物を経口減感作療法に応用する目的で下記の研究を行った。1.アレルゲン或いはペプチド遺伝子の食品微生物への導入コナヒョウヒダニから選定したワクチン用遺伝子derf7を、以前当研究室で開発したpRN14シャトルベクターに挿入し、プロバイオティクスL137株に導入した。プラスミドベクターとして存在していることを分子生物学的に確認した。内在性プラスミド間の相同性組換えを利用した安全性ベクターの構築を試みているが、取得には至っていない。2.機能性プロバイオティクスによる食品の製造とアレルゲンの定性・定量ワクチン用遺伝子derf7を導入したプロバイオティクスL137株を培養し、粗酵素液を用いて定量を行ったところ、1リットル培養液当たり約1mgの生産量であった。これは大腸菌を宿主に用いた時の五十分の一であった。組換え株を大量培養し、ワクチン用抗原としてDerf7をSDS-PAGE上で単一になるまで精製を行った。そのサンプルを用いて、ダニ喘息患者血清のIgE抗体との結合能を検定したところ、組換え抗原タンパク質は有意な結合能を有していた。3.機能性プロバイオティクスの食品としての薬理評価・安全性試験野生型プロバイオティクスL137株の毒性試験を調べるために、熱死菌体をマウスに腹腔内と経口で投与したが、急性毒性などの重篤な症状は認められなかった。

The following is a summary of the research on the development of food microorganisms and their production and use as desensitization therapy. 1. Introduction of food microorganism from the original research laboratory pRN14 into the original research laboratory L137 strain. The existence of the gene is confirmed by molecular biology. The identity of the intrinsic attribute is changed between the security attribute and the construction attribute, and the acquisition attribute is changed between the two attributes. 2. Functional food production and qualitative and quantitative analysis of the enzyme derf7 introduced into the culture of L137 strain, crude enzyme solution and quantitative analysis of the culture solution when the production of about 1mg. The host of E. coli is 50 minutes away. In order to obtain a high yield of the strain, the strain was purified by SDS-PAGE using an antigen. The binding energy of IgE antibody in serum of asthmatic patients was determined by the method of combination of anti-IgE antibody and anti-IgE antibody. 3. Functional food safety test Wild type food safety test L137 toxicity test heat killed bacteria intraperitoneal injection acute toxicity test severe symptoms