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小胞体膜電位の光学的測定による細胞内膜系イオンチャネルの機能解析

通过内质网膜电位光学测量分析细胞内膜离子通道的功能

基本信息

批准号：
16659055
负责人：
山下勝幸
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.小胞体-核膜にBK型カリウムチャネルが存在し、このチャネルがカルシウムストアからのカルシウム放出を制御することを明らかにした。(1)発生初期鶏胚の網膜神経上皮を単離し、低カルシウム低浸透圧溶液によって個々の細胞を膨化させ、パッチピペットを用いて細胞膜を除去した後、核膜の表面からパッチクランプ記録を行った。その結果、核膜の内腔側の電位を正方向に変化させることにより活性化される単一チャネル電流が記録された。このチャネルの活性化には内腔側のカルシウム濃度を上げる必要があった。これらの電位依存性、及び、カルシウム依存性から、BK型カリウムチャネルの活性化が示唆された。さらに、細胞膜を除去し核膜を露出した標本に、BK型カリウムチャネルに対する抗体を適用し免疫組織染色を行った。その結果、核膜にBK型カリウムチャネルが存在することが示唆された。(2)細胞膜透過性のBK型カリウムチャネル阻害剤であるキニジンを投与すると、カルシウムストアからのカルシウム放出が有意に抑制された。また、BK型カリウムチャネルの選択的阻害剤であるイベリオトキシンを、エレクトロポレーション法によって細胞内へ導入した結果、カルシウムストアからのカルシウム放出が有意に抑制された。2.カルシウムストアの膜電位変化により駆動されるカルシウムオシレーションのモデルの考案。発生初期鶏胚の網膜神経上皮を、膜電位感受性蛍光色素[DiOC_5(3)]で染色し、リアルタイム共焦点レーザー顕微鏡によって小胞体-核膜の膜電位を光学的に測定した。その結果、自発的な膜電位オシレーションが観察された。この膜電位変化の振幅は約45mVに及び、カルシウムストアからのカルシウム放出の駆動力を増減させうると想定された。

1. The small cell body-the nuclear membrane BK type, the nuclear membrane, the nuclear membrane, the nucleus, the The main results were as follows: (1) in the early stage of embryo, the epithelium of the embryonic network was isolated, the low permeable solution of the low permeable medium was used to expand the cells of the two embryos, and the cell membrane of the embryo was removed by using the cell membrane of the embryo. The nuclear membrane surface was sequenced. The results show that the positive direction of the electric potential in the inner cavity of the nuclear membrane leads to the activation of electrical current records. Please tell me how to activate the internal cavity and the necessary temperature. The dependence of electric potential, the dependence of electric potential and the activation of model BK on the activation of electrical potential dependence are After removing the nuclear membrane, the nuclear membrane was exposed, and the BK type antibody was detected by immune tissue staining. The results showed that there was a significant difference in the nuclear membrane type BK gene expression. (2) membrane permeability (BK), cell membrane permeability (BK), membrane permeability (BK), cell membrane permeability (BK). The blocking effect of the selection of BK and BK devices is that there is a significant increase in the number of cells in the cell. two。 We need to know if there are any changes in the membrane potential, and that there is no need to make an examination. In the early embryonic stage, the epithelium of the embryonic membrane, the membrane electroreceptor phosphochrome [DiOC_5 (3)] staining, the confocal microscopy, the microarray, the determination of the optics of the membrane potential of the small cell-nuclear membrane. The results of the test, the self-defined film potential, the environmental monitoring system, and the monitoring results. The amplitude of the film potential is about 45mV and the amplitude of the film potential is about the same as that of the film potential.