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RNAiによるノックダウンウサギ・モデルの開発および動脈硬化研究への応用

基于RNAi的敲除兔模型的建立及其在动脉硬化研究中的应用

基本信息

批准号：
16659099
负责人：
範江林
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

RNAiトランスジェニック(Tg)ベクターを用いて、ノックダウンTgウサギの作製を試みた。まず、small interfering RNA (siRNA)を発現できるようにtRNAプロモーターを用いて、インスレーター配列に挿入されたベクターの作成に成功した。インスレーター配列とは、トランスジーンのpositional effectを防ぐことができる配列である。ノックダウンTgウサギの作製はマウスよりも数段に時間と手間がかかるため、多数のF0の取得が困難である。そこで、インスレーター配列の導入により、得られたF0ウサギのすべてにおいてsiRNAが発現することが期待できる。ノックダウンされる標的遺伝子としては脂質代謝異常や高脂血症、動脈硬化に関わる遺伝子であるコレステロール転送蛋白(CETP)遺伝子の標的配列をスクリーニングして、候補配列を選択した上で、ノックダウンウサギの作製を目指している。ノックダウンウサギを作る前段階として、導入されるsiRNAによるウサギCETP遺伝子のノックダウン抑制効率をin vitroで評価できるスクリーニング系を確立ことである。CETPは肝臓でしか発現していない遺伝子であるので、siRNAによるCETP遺伝子発現の抑制を調べるには、適切なウサギ肝臓由来の細胞株が必要となる。現在市販されているウサギ肝細胞株は存在しないので、産業技術総合研究所・中西真人氏より16個ウサギ肝細胞株を分与してくれた。これらの細胞株を用いて、CETP遺伝子抑制の評価が可能な細胞株を探っている。

RNAi Rituals (Tg) Rituals The discovery of small interfering RNA (siRNA) was successful in the preparation of tRNA sequences. The positional effect of the color pattern is to prevent the color pattern from changing. It is difficult to obtain most of the F0. The expression of siRNA is expected to be detected in the presence of F0. The target gene of CETP gene is selected from the list of candidate genes, and the target gene of CETP gene is selected from the list of candidate genes, and the target gene of CETP gene is selected from the list of candidate genes. The first step of the process is to introduce siRNA into the system, and the inhibition rate of CETP gene is to be evaluated in vitro. CETP gene expression is regulated by siRNA, and cell lines derived from CETP gene expression are necessary. Currently, there are 16 liver cell lines in the market, and 16 liver cell lines in the National Institute of Industrial Technology. Evaluation of CETP gene inhibition in cell lines and possible cell lines.