間葉系幹細胞への血管新生遺伝子導入による血管網構築を応用した顎骨再生治療の確立

通过将血管生成基因导入间充质干细胞，建立应用血管网络构建的颌骨再生疗法

• 批准号: 16659564
• 负责人: 松本 剛一
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659564/
• 关键词: BMSC; HGF; GENE THERAPY; FGF-2

1、bone marrow stromal celとβ-TCFブロックの3次元培養(BMSC/β-TCP複合体の形成)F344系6〜7週齢雄性ラット大腿骨より骨髄細胞を採取した。骨髄細胞は10%FCS alpha-MEM培地にて培養する。3日後に浮遊細胞を除去し、得られた付着細胞をbone marrow stromal cell(BMSC)とし、さらにBMSCがconfluentになるまで4日間培養を行った。その後、trypsin-EDTA処理を行い細胞を剥離した後、24-well flat bottom plate中で1X10^6 cells/mlのBMSCをβ-TCPブロック(2mmX2mm)上に静かに播種した。培養液中にDEX, vitamin C phosphate, β-glycerophosphateを含んだ骨形成培地を用いて2週間の3次元培養を行った。2、BMSC/β-TCP複合体への遺伝子導入と皮下移植培養終了3日前にBMSC/β-TCP複合体にHGF adenovirusを感染させた後、同系ラット皮下にBMSC/β-TCP複合体の移植を行った。またHGF遺伝子導入によるBMSCのアルカリフォスファターゼ活性について解析を行ったが、コントロール群に比べ有意な上昇はみられなかった。3、骨形成の評価移植後4週間目に皮下からBMSC/β-TCP複合体を摘出し、組織学的に骨形成について解析を行った。遺伝子導入群において良好な骨形成がみられた。しかしながらコントロール群においても骨形成は認められ、HGF遺伝子導入群とコントロール群との間に明らかな骨形成能の違いは認められなかった。また血管形成についてもコントロール群との間には差異はみられなかった。

1. Bone marrow stromal cel and β-TCF 3-dimensional culture (BMSC/β-TCP complex formation) F344 line was collected from 6 to 7 weeks old male femur bone marrow cells. Bone marrow cells were cultured in 10% FCS alpha-MEM. After 3 days, the floating cells were removed, and the bone marrow stromal cell (BMSC) with attached cells was obtained, and the BMSC was confluent and cultured for 4 days. After treatment with trypsin-EDTA, the cells were stripped, and then seeded on a 24-well flat bottom plate with 1X10^6 cells/ml of BMSC and β-TCP ブロック (2mmX2mm). The culture medium contained DEX, vitamin C phosphate, and β-glycerophosphate, and the bone formation soil was cultured in three dimensions for 2 weeks. 2. After the BMSC/β-TCP complex was introduced and subcutaneously transplanted and cultured 3 days ago, the BMSC/β-TCP complex was infected with HGF adenovirus, and the syngeneic BMSC/β-TCP complex was subcutaneously transplanted. The HGF legacy is introduced into the BMSC active materialいてanalytic を行ったが, コントロール群に比べ意なRISING はみられなかった. 3. Evaluation of bone formation: The BMSC/β-TCP complex was extracted subcutaneously and analyzed by histology during the 4 weeks after transplantation. The remaining bones are introduced into the group of good bones.しかしながらコントロール群においてもbone forming はcognitionめられ、HGF 伝子Director Join the group of とコントロールgroup との间に明らかなbone forming energy のviolation いはcognize められなかった.またvascularizationについてもコントロール群との间にはDIFFERENCEはみられなかった.