間葉系幹細胞への血管新生遺伝子導入による血管網構築を応用した顎骨再生治療の確立

通过将血管生成基因导入间充质干细胞，建立应用血管网络构建的颌骨再生疗法

• 批准号: 16659564
• 负责人: 松本 剛一
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659564/
• 关键词: BMSC; HGF; GENE THERAPY; FGF-2

1、bone marrow stromal celとβ-TCFブロックの3次元培養(BMSC/β-TCP複合体の形成)F344系6〜7週齢雄性ラット大腿骨より骨髄細胞を採取した。骨髄細胞は10%FCS alpha-MEM培地にて培養する。3日後に浮遊細胞を除去し、得られた付着細胞をbone marrow stromal cell(BMSC)とし、さらにBMSCがconfluentになるまで4日間培養を行った。その後、trypsin-EDTA処理を行い細胞を剥離した後、24-well flat bottom plate中で1X10^6 cells/mlのBMSCをβ-TCPブロック(2mmX2mm)上に静かに播種した。培養液中にDEX, vitamin C phosphate, β-glycerophosphateを含んだ骨形成培地を用いて2週間の3次元培養を行った。2、BMSC/β-TCP複合体への遺伝子導入と皮下移植培養終了3日前にBMSC/β-TCP複合体にHGF adenovirusを感染させた後、同系ラット皮下にBMSC/β-TCP複合体の移植を行った。またHGF遺伝子導入によるBMSCのアルカリフォスファターゼ活性について解析を行ったが、コントロール群に比べ有意な上昇はみられなかった。3、骨形成の評価移植後4週間目に皮下からBMSC/β-TCP複合体を摘出し、組織学的に骨形成について解析を行った。遺伝子導入群において良好な骨形成がみられた。しかしながらコントロール群においても骨形成は認められ、HGF遺伝子導入群とコントロール群との間に明らかな骨形成能の違いは認められなかった。また血管形成についてもコントロール群との間には差異はみられなかった。

1。从F344系列6-7周的雄性大鼠的股骨中收集了骨髓基质CEL和β-TCF块（BMSC/β-TCP复合物的形成）骨髓细胞的三维培养。在10％FCSα-MEM培养基中培养骨髓细胞。三天后，除去浮动细胞，并将所得的附着细胞用作骨髓基质细胞（BMSC），并培养4天，直到BMSC汇合。之后，通过胰蛋白酶-EDTA处理将细胞分离，将1x10^6个细胞/ml的BMSC轻轻播种到24孔平底板中的β-TCP块（2mmx2mm）。使用培养基中含有DEX，维生素C磷酸盐和β-甘油磷酸盐的骨形成培养基进行三维培养。 2.基因转移到皮下移植培养的前3天前3天，在皮下移植培养物结束前3天，在使用HGF腺病毒感染后，将syngeneic大鼠植入BMSC/β-TCP复合物。此外，分析了由于HGF基因转移而引起的BMSC的碱性磷酸酶活性，但与对照组相比，没有观察到显着增加。 3。骨形成的评估：植入四周后，从皮肤中去除BMSC/β-TCP复合物，并通过组织学分析骨形成。在基因转移组中观察到良好的骨形成。然而，在对照组中也观察到骨形成，在HGF基因转移组和对照组之间未观察到骨形成能力的明显差异。此外，对照组的血管生成中没有观察到差异。