植物Gα-GPCRを介するシグナル化合物及び伝達因子の探索系の開発ならびに探索

植物Gα-GPCR介导的信号化合物和转移因子检测系统的开发与探索

• 批准号: 17658055
• 负责人: 山口 五十麿
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658055/
• 关键词: GPCR; Gα; AtGPA1; QL21; yeast two-hybrid system

出芽酵母(Saccharomyces cervisiae)の性フェロモンシグナル伝達系を利用したシロイヌナズナのGPCRの取得を目指した。FAR1,ScGPA1二重変異株にFus1-nphを導入し、さらにAtGPA1とコントロールとしてScGPA1を導入した。AtGPA1は酵母のGβγを抑えなかった。そこで、ScGPa1とAtGPA1のキメラを製作した。ScGPA1のC末端側5,10,20アミノ酸残基をAtGPA1の配列で置換したchimeraA, chimeraB, chimeraCとAtGPA1のN末端側39アミノ酸残基をScGPA1のN末端43アミノ酸残基で置換したchimeraEを作成し、FAR1、ScGPA1二重変異、Fus1-nphを導入株に導入した。これらのchimera遺伝子を導入した変異株では、Gβγの活性を抑えることが出来た。GPCRのスクリーニングには、より長くAtGPA1の配列を有するchimeraBを用いた。この形質転換酵母にシロイヌナズナcDNAライブラリーを導入し、リガンドとしていくつかの植物ホルモン、または植物からの抽出物を与えた条件で酵母を培養し、幾つかの遺伝子をクローニングした。これらの遺伝子の解析を進めている。上述の実験に加えて、yeast two-hybrid systemを用いて、AtGPA1結合タンパク質の取得を試みた。野生型AtGPA1と変異を導入したAtGPA1QLを用いた。スクリーニングの結果、ATGPA1QLと相互作用するクローンとしてQL21を得た。QL21はキナーゼ領域を有し、データベース上ではMAPKKKファミリーに属していた。GαとMAPKKKの相互作用は報告例がなく、新たなシグナル伝達様式を構成する可能性を示唆しており、興味深く、その機能の解明を継続中である。

The aim of this paper is to obtain the GPCR of Saccharomyces cervisiae by using the gene expression system of Saccharomyces cervisiae FAR1,ScGPA1 double heterosis Fus1-nph is introduced, AtGPA1 and ScGPA1 are introduced. AtGPA1 Yeast Gβγ.そこで、ScGPa1とAtGPA1のキメラを制作した。ScGPA1 C-terminal 5, 10, 20 amino acid residues to AtGPA1 alignment, chimeraA, chimeraB, chimeraC to AtGPA1 N-terminal 39 amino acid residues to ScGPA1 N-terminal 43 amino acid residues to make, FAR1, ScGPA1 double variant, Fus1-nph to introduce The chimera gene is introduced into the plant, and the activity of Gβγ is suppressed. GPCR is a very important tool in the design of GPA1. The yeast is cultured under conditions such as introduction, extraction, extraction, etc. The analysis of the original text of the text is carried out in the middle of the text. The above-mentioned implementation of the two-hybrid system, AtGPA1 and the acquisition of quality test wild-type AtGPA 1 The results of ATGPA1 and QL interaction were obtained. QL21 has a domain name, a domain name, and a domain name. The interaction between Gα and MAPKKK is reported as a case study, a new approach to the formation of a formula, a demonstration of the possibility, a deep interest, and a clarification of the function.