幅広い魚種で機能する補体マスターキー分子の作出

创建在多种鱼类中发挥作用的补体主关键分子

• 批准号: 17658089
• 负责人: 中尾 実樹
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658089/
• 关键词: 補体; C3; 立体構造; 種間適合性; cDNAクローニング; ホモロジーモデリング; C3d; レセプター; 魚類; 免疫; 補体制御因子; CR2

本研究は、魚類補体成分C3の活性化断片のうち、B細胞への結合活性が示唆されている分子量約35kDaのC3dについて、多様な魚種問における構造の違いと、構造・機能相関を解明し、幅広い魚種で活性を発現しうる補体のマスターキー分子を創出するための基礎的知見を得ることを目的とした。まず、コイ、ニジマス、フグのC3d配列をもとに、10種の海産養殖対象魚種から、C3dをコードするcDNAをクローニングした。推定アミノ酸配列を、SwissModelを用いたホモロジーモデリング法に供試してc3dの立体構造を推定し、魚種間のC3d構造の違いを検討した。その結果、研究対象とした全魚種のC3dは非常によく保存されたαヘリックスのバレル構造をとることが判明した。一方、B細胞上でC3dを認識するレセプターの候補cDNAのクローニングにも着手し、Short Consensus Repeat(SCR)モジュールが7回繰り返した構造のアミノ酸配列をコードするcDNAをコイリンパ球画分より単離した。しかしながら、このタンパク質は膜結合ドメインを含まない可溶性タンパク質であったため、ゼブラフィッシュゲノムデータベースから、SCRモジュールから成る膜タンパクをコードする遺伝子を探索し、哺乳類のC3dレセプターに相同性を示すcDNAをクローニングすることに成功した。これらのタンパク質の活性をコイ白血球を用いて評価することを試みたが、上記のような高い構造類似性にも関わらず、魚種の壁を越えて活性を示すことはほとんど観察されなかった。

This study aims to provide a basic understanding of the activation of fish complement component C3, the binding activity of B cells, and the molecular weight of C3d, which is about 35kDa. C3d cDNA of 10 mariculture target species The estimation of C3d structure and the analysis of C3d structure between species were studied by using the SwissModel method. The results and research subjects reveal that the C3d of the entire fish species is closely related to the well-preserved alpha-spider structure. A Short Consensus Repeat(SCR) module is constructed to identify cDNA candidates for C3d on a single, B cell. The study of membrane protein binding sites, including soluble protein binding sites, was successful in exploring the identity of mammalian C3d cDNA. The activity of white blood cells is evaluated by the structural similarity between the two species.

项目成果

Two divergent isotypes of the fourth complement component from a bony fish, the common carp (Cvprinus carpio)

来自硬骨鱼鲤鱼 (Cvprinus carpio) 的第四种补体成分的两种不同同种型

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Immunology 175(7)
• 作者: Mutsuro J Tanaka N;Kato Y;Dodds AW;Yano T;Nakao M
• 通讯作者: Nakao M

Cloning of a glycosylphosphatidylinositol-anchored alpha 2-macroglobulin cDNA from the ascidian Ciona intersinalis

从海鞘中克隆糖基磷脂酰肌醇锚定的 α2-巨球蛋白 cDNA

• 发表时间: 2005
• 期刊: Molecular Immunology 42(6)
• 作者: Hammond JA;Nakao M;Smith VJ
• 通讯作者: Smith VJ

Molecular cloning of cDNA encoding C3d, an activated fragment of the complement component C3, from bony fish relevant to aquaculture

水产养殖相关硬骨鱼中补体成分 C3 的激活片段 C3d 编码 cDNA 的分子克隆

• 发表时间: 2007
• 期刊: UPV Journal of Natural Sciences 11(In press)
• 作者: Yoshida T;Kato-Unoki Y;Somamoto T;Kondo M;Yamashita H;Peralta JP;Hidalgo ARD;Nakao M
• 通讯作者: Nakao M

Lectin pathway of bony fish complement : identification of two homologs of the mannose-binding lectin associated with MASP2 in the common carp (Cyprinus carpio)

硬骨鱼补体的凝集素途径：鉴定与鲤鱼 (Cyprinus carpio) 中 MASP2 相关的甘露糖结合凝集素的两个同源物

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Immunology 177
• 作者: Nakao M;Kajiya T;Sato Y;Somamoto T;Kato-Unoki Y;Matsushita M;Nakata M;Fujita T;Yano T
• 通讯作者: Yano T

Discovery of a novel immunoglobulin heavy chain gene chimera from common carp (Cyprinus carpio)

发现鲤鱼（Cyprinus carpio）新型免疫球蛋白重链基因嵌合体

• 发表时间: 2005
• 期刊: Immunogenetics 57
• 作者: Savan;R.;Aman;A.;Nakao;M.;Watanuki;H.;Sakai;M.
• 通讯作者: M.