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菌増殖に関連する新たな因子を指標とした黄色ブドウ球菌感染症簡易診断法の開発

以与细菌生长相关的新因素为指标，开发金黄色葡萄球菌感染的简单诊断方法

基本信息

批准号：
17659170
负责人：
坂田憲昭
金额：
$ 1.15万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659170/
关键词：
黄色ブドウ球菌菌体外タンパク質感染症診断法

项目摘要

昨年度は試料中IsaA検出のための高感度な系(検出感度:1.5ng/ml)を確立した。本年度はこれを用いて、生体試料測定時に問題となる点についてさらに検討し、実際に血清中IsaAの検出を試みた。IsaAを指標として、黄色ブドウ球菌感染をいち早く確実に把握するためには、このタンパク質が、感染・増殖における早期段階から存在する必要がある。そこで、その産生プロフィールの詳細を調べた。その結果、培養上清中のIsaAは、増殖の開始直後から検出され始め、その量は菌増殖に伴って指数関数的に増加し、定常期の初めまで維持された。また、菌体表面上には対数増殖期を通して一定量のIsaAが常に存在していた。感染患者血清中には、黄色ブドウ球菌の抗原タンパク質に対して多量の抗体の産生されることが予想される。こうした抗体はIsaAの抗原部位をマスクするため、検出系の感度を大きく低下させる可能性がある。そこで、IsaA抗体の存在を骨髄炎患者血清と健康人について調べたところ、患者血清に高力価の抗体が確認された。一方、健康人ではその抗体価は全体的に低く、検出系のシグナル強度から両者を明確に区別することが可能であった。しかしながら、健康人由来であっても、一部の試料では患者のものと差のないシグナルを生じた。そこで、そうした血清中に存在する抗体の検出系に与える影響を調べるため、高力価抗体を有する健康人血清にヒスチジンタグ標識IsaAを添加しその検出を試みたところ、抗原タンパク質の存在を示す明確なシグナルは得られなかった。そこで、抗原抗体複合体を解離させるため、試料に熱処理を施したところIsaAの検出が可能となった。以上、本研究で確立した系を用い、感染に伴う黄色ブドウ球菌の増殖を極めて初期の段階で、IsaAを指標として捉えることが可能であった。今後、更なる感度の向上や常在する抗体のより有効な不活化方法等を検討し、また、検査に適する試料の選択や臨床経過と検査結果の相関等を明らかにして、実用化につなげて行きたい。

IsaA's high-sensitivity system (sensitivity: 1.5ng/ml) was established among the samples last year. This year, there are problems with using and testing biological samples, and there are problems in measuring biological samples, and IsaA in serum has been tested in this year. IsaA is an indicator of infection, and the yellow color of coccus infection is early and confirmed.は、このタンパク性が、Infection and reproduction におけるThe existence of the early stage is necessary がある.そこで、そのproducedプロフィールのDetailsを动べた.そのResults, のIsaA in the culture supernatant, のstart of propagation, から検出されstart め, そThe amount of bacterial growth is accompanied by the increase of the index and the maintenance of the steady period. There is a certain amount of IsaA on the surface of the bacterial cells during the growth period. In the serum of infected patients, a large amount of anti-antibodies produced by the anti-antigens of Bacillus xanthus cocci and the yellow cocci were detected.こうしたantibodyはIsaAのantigen siteをマスクするため、検出组のsensitivityを大きくlower possibilityさせるがある. The presence of IsaA antibodies in the serum of osteoarthritis patients and healthy people, and the presence of high-resistance antibodies in patients' serum were confirmed. On the one hand, the overall strength of antibodies in healthy people is low, and the strength of the antibodies in the system is clear and the difference is possible.しかしながら, Healthy People Origins であっても, 1st Sample ではPatient のものと difference のないシグナルを生じた. The existence of する antibodies in the serum of そこで and そうしたに and the influence of える on the presence of するため and high strength 価antibodies するHealthy human serum にヒスチジンタグIsaAをaddしその検出をtrialみたところ, antigen タンパク性のexistingをshowすclearなシグナルは得られなかった.そこで, antigen-antibody complex を dissociation させるため, sample に heat treatment を Shi したところIsaA の検出がとなった. As mentioned above, this study has not established that the system is used, the infection is at the initial stage of the proliferation of yellow bacteria, and the IsaA indicator is not likely to be captured. From now on, we will update the sensitivity and effectiveness of antibodies and inactivation methods, etc. The selection of test materials and the correlation between clinical trials and investigation results are as follows: