シグナル分子を用いた新規象牙質再生医療の開発

利用信号分子开发新型牙本质再生医学

• 批准号: 17659601
• 负责人: 小泉 忠彦
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659601/
• 关键词: シグナル分子; 象牙質; 基底膜成分; 歯乳頭; 発生; 再生; 組織工学; 不死化

象牙質形成機構を解析する目的で、本年度は象牙芽細胞前駆体培養系の確立を試みた。そのため未分化な歯胚細胞が存在するマウス切歯根尖部の歯乳頭組織より象牙芽細胞前駆体(Mouse Dental papilla cells : MDP)の採取を試みた。組織採取後、培養皿上に間葉系細胞の形態を示す細胞のoutgrowthが確認された。次に安定した細胞株を作製するためMDPの細胞不死化を試みた。MDPの不死化にはヒトパピローマウイルス16型E6遺伝子のPDZ結合モチーフ欠損変異体を遺伝子導入し、p53遺伝子の不活性化による寿命延長を試みた。遺伝子導入した結果、MDPの寿命は延長し集団倍加数100以上継代可能な不死化細胞であることが確認された。次にMDPの分化能力を調べるため石灰化誘導培地で長期間培養したところ、高いアルカリフォスファターゼ活性と石灰化物の沈着が観察された。次に象牙芽細胞の分化を確かめるためRT-PCR法で遺伝子発現を観察したところ、骨シアロプロテインおよびオステリックス等の骨芽細胞分化に関わる遺伝子群の発現は観察されたが、象牙質マーカーであるdentin sialoprotein(DSP)の発現は観察されなかった。そこで上皮-間葉系の相互作用を利用して象牙芽細胞への分化誘導を行う目的で、基底膜成分から構成されているマトリゲルを用いて実験を行った。その結果、MDPはマトリゲル上でMDPは象牙芽細胞と類似した紡錘状の形態を示し、さらにDSPを発現する象牙芽細胞に分化する事が確認された。以上の結果より、MDPには象牙芽細胞への分化能力を有する前駆体細胞手段が存在することが明らかにされた。次年度は、象牙芽細胞分化誘導能力を有するシグナル分子の探索をMDPを用いて行うことを予定している。

To analyze the mechanism of dentin formation, this year, we tried to establish a culture system of ivory bud cell precursors. The undifferentiated dental germ cells were collected from the dental papilla tissue of the tooth tip and the ivory bud precursor (Mouse Dental Papilla cells : MDP). After tissue sampling, morphology of mesenchymal cells on culture dishes was shown and outgrowth of cells was confirmed. MDP cells are stable and stable. The inactivation of MDP by PDZ combined with p53 gene was studied. As a result of gene introduction, the life of MDP is extended to more than 100 generations, and it is possible to confirm that the cells are not dead. In addition, the differentiation ability of MDP was regulated by calcareous induction culture, and the activity of calcareous compound was observed in long-term culture. In addition, the differentiation of ivory bud cells was confirmed by RT-PCR, and the development of gene subgroup was observed by RT-PCR. The development of dentin sialoprotein(DSP) was observed by RT-PCR. The interaction of epithelial-mesenchymal system was used to induce differentiation of ivory bud cells, and the composition of basement membrane was used to induce differentiation. As a result, MDP was able to demonstrate the spindle-like morphology of ivory bud cells and confirm the differentiation of ivory bud cells. As a result, MDP has the ability to differentiate from embryonic cells, and the ability to differentiate from embryonic cells has been demonstrated. In the next year, the ability to induce differentiation of ivory bud cells has been explored.

项目成果

Characterization of immortalized mouse dental follicle cells.

永生化小鼠牙囊细胞的表征。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bull.Kanagawa Dent.Col. 33
• 作者: 岸 輝雄;小口信行;塙 隆夫;Iwaya Yukari;Kono Hiroshi;Miyamoto Motoharu;Kono Hiroshi;Ban Seiji;Ban Seiji;Seiji Ban;Seiji Ban;Hiroshi Kono;Hideo Sato;Motoharu Miyamoto;伴 清治;Miyamoto M.;Yanao H;山下大輔;Ban Seiji;T.Yokoi et al.
• 通讯作者: T.Yokoi et al.

Molecular mechanisms of Periodontal development, and its prospect of regenerative medicine for periodontium.

牙周发育的分子机制及牙周再生医学前景。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bull.Kanagawa Dent.Col. 33
• 作者: 岸 輝雄;小口信行;塙 隆夫;Iwaya Yukari;Kono Hiroshi;Miyamoto Motoharu;Kono Hiroshi;Ban Seiji;Ban Seiji;Seiji Ban;Seiji Ban;Hiroshi Kono;Hideo Sato;Motoharu Miyamoto;伴 清治;Miyamoto M.;Yanao H;山下大輔;Ban Seiji;T.Yokoi et al.;M.Saito et al.
• 通讯作者: M.Saito et al.

Molecular mechanisms of periodontium development. -Analysis of cementogenesis based on the cementum specific marker.

牙周组织发育的分子机制。

• 期刊: Bull.Kanagawa Dent.Col. (in press)
• 作者: 岸 輝雄;小口信行;塙 隆夫;Iwaya Yukari;Kono Hiroshi;Miyamoto Motoharu;Kono Hiroshi;Ban Seiji;Ban Seiji;Seiji Ban;Seiji Ban;Hiroshi Kono;Hideo Sato;Motoharu Miyamoto;伴 清治;Miyamoto M.;Yanao H;山下大輔;Ban Seiji;T.Yokoi et al.;M.Saito et al.;M.Saito et al.
• 通讯作者: M.Saito et al.