生理的多型性の基盤となる遺伝子的背景の解析法開発

开发分析生理多态性遗传背景的方法

• 批准号: 18657080
• 负责人: 井上 馨
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657080/
• 关键词: 人類学; 分子生物学; 寒冷反応

1.マウスC57BL/6 strainを用いた寒冷刺激によって変動する遺伝子群の解析Suppression Subtractive Hybridization法によって、寒冷条件下で発現し,正常な状態(寒冷ストレスのない22度C飼育環境下)では発現しないmRNAを検定しcDNAとしてシークエンスした。実績があり、信頼性の高いInvitrogen社とClontech社の製品を用い、プロトコールに基づいて行った。具体的にはPCR-Select cDNA Subtraction法であるため、わずかな発現の差も検出可能であるが、偽陽性の確率も高まる。そのため、実験は3回行って寒冷刺激を与えたマウスでのみ、コントロールとハイブリダイズせず発現が増強しているものを選択し、56クローンが得られた。この中で、あきらかに偽陽性と考えられる遺伝子を除き、40クローンが侯補となった。現在報告されている、明らかな機能につなげられるシグナル伝達系に属するグループに分けることはできなかった。2.マウスBalbC strainを用いて上記1と同様の実験を行った。結果は候補として30クローンの遺伝子が得られたが、C57BL/6 strainとはかなり異なる結果であった。3.今回の研究結果について実際はヒトにおける寒冷刺激によってうごく遺伝子があるのかどうか、生理的多型性というものが、遺伝子的レベルでも示唆できるかどうかが今回の萌芽研究の目的である。今後ヒトから採血して、genomic DNAを抽出し、アフィメトリックス社などのDNAアレイキットを用いて、寒冷ストレスに関係するSingle Nucleotide Polymorphism(SNP)を行い、その解析と解釈に今回のマウスのデータを有効に用いることができると考えている。

1. Youdaoplaceholder0 ウスC57BL/6 strainを Suppression Subtractive is analyzed by <s:1> た cold stimulation によって variable する subtractive 伝 Under the condition of Hybridization method に よ っ て, cold で 発 し, normal な (cold ス ト レ ス の な い 22 degrees C) feeding and breeding environment で は 発 now し な い mRNA を 検 set し cDNA と し て シ ー ク エ ン ス し た. Be performance が あ り, letter 頼 の high い Invitrogen club と Clontech club の products を い, プ ロ ト コ ー ル に base づ い て line っ た. Specific に は PCR - Select cDNA Subtraction method で あ る た め, わ ず か な 発 now poor の も 検 makes possible で あ る が, high false positive の really rate も ま る. そ の た め, be 験 は 3 return っ て cold stimulation を and え た マ ウ ス で の み, コ ン ト ロ ー ル と ハ イ ブ リ ダ イ ズ せ ず 発 が now raised strong し て い る も の を sentaku し, 56 ク ロ ー ン が must ら れ た. こ の で, あ き ら か に false-positive と exam え ら れ る posthumous son 伝 を except き, 40 ク ロ ー ン が our waiting と な っ た. Now report さ れ て い る, Ming ら か な function に つ な げ ら れ る シ グ ナ ル 伝 da series に belongs す る グ ル ー プ に points け る こ と は で き な か っ た. 2. Youdaoplaceholder6 ウスBalbC strainを use ウス て to record 1と in the same way as <s:1> experiment を line った. Results は alternate と し て 30 ク ロ ー ン の heritage 伝 sons が may ら れ た が, C57BL / 6 strain と は か な り different な る results で あ っ た. 3. Now back to の results に つ い て be interstate は ヒ ト に お け る cold stimulation に よ っ て う ご く posthumous son 伝 が あ る の か ど う か, physiological polytypism と い う も の が, but son 伝 レ ベ ル で も in stopping で き る か ど う か が today back purpose の の germination study で あ る. Future ヒ ト か ら blood し を て, genomic DNA extraction し, ア フ ィ メ ト リ ッ ク ス club な ど の DNA ア レ イ キ ッ ト を with い て, cold ス ト レ ス に masato is す る Single Nucleotide Polymorphism (SNP) line を い, そ と solutions の 釈 に today back の マ ウ ス の デ ー タ を have sharper に with い る こ と が で き る と exam え て い る.