新しい組織化学「酵素抗原法」の技術開発:組織切片において特異抗体産生細胞を染める

开发新的组织化学“酶抗原法”技术：对组织切片中特异性抗体产生细胞进行染色

• 批准号: 18659103
• 负责人: 堤 寛
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659103/
• 关键词: 酵素抗原法; 特異抗体産生形質細胞; 酵素抗体法; リンパ節; 脾臓; horseradish peroxidase; ovalbumin; keyhole limpet hemocyanin

「酵素抗原法」は、酵素やハプテンなどで標識した抗原を用いて、組織切片上の特異抗体産生細胞を可視化する技術である。本技法により、「特異抗体産生細胞の局在観察」という新たな視点で病態を解析できる。我々は、酵素抗原法の再現を行い、horseradish peroxidase(HRP)を足底部から皮下免疫したラットの脾臓と膝窩リンパ節の凍結組織切片を、HRPで染色して、抗HRP抗体産生細胞を証明した。今回我々は、ovalbumin(OA)とkeyhole limpet hemocyanin(KLH)を用いて、HRP以外の抗原でも、酵素抗原法が適用可能か検証した。具体的には、OAとKLHをラットの足底部へ皮下免疫した後、脾臓および腋窩・膝窩・鼠蹊部のリンパ節を採取して、4%パラホルムアルデヒド固定後凍結組織切片を作製した。この切片に対して、ビオチン標識した各抗原を用いて組織染色を試みた。さらに、酵素処理による切片内の抗体活性の賦活化も検討した。その結果、採取したすべての組織において、切片を蛋白分解酵素処理することで、OAとKLHに対する抗体産生細胞が検出された。各抗原に特異的な抗体産生細胞の割合は、HRPを免疫した際と同様に、両抗原ともに、免疫部位に近いリンパ節の方が脾臓よりも高かった。以上の結果から、HRP以外の抗原でも、酵素抗原法が適用可能であることが証明された。そして、抗原の曝露がより著しい部位に、より多くの特異抗体産生細胞が集蔟することも再確認できた。

"Enzyme antigen method" is a technique for visualizing specific antibody producing cells on tissue sections. This technique is based on the observation of specific antibody-producing cells. The enzyme antigen method was used to reproduce the horseradish peroxidase(HRP), and the frozen tissue sections of the spleen and knee joints were stained with HRP. The anti-HRP antibody-producing cells were proved. Now, ovalbumin(OA), keyhole limpet hemocyanin(KLH) and other antigens other than HRP can be used. Specific OA, KLH and foot subcutaneous immunization, spleen and armpit, knee socket, groin joint were taken, 4% of the frozen tissue sections were prepared after fixation This section is labeled with the antigen and stained with the tissue. The activation of antibody activity in sections treated with enzymes was investigated. The results were obtained from tissue samples, sections, proteolytic enzyme treatments, OA and KLH. Antigen-specific antibody-producing cells are fused together, HRP is immunized, and HRP is immunized at the same time. The above results show that the enzyme antigen method is applicable to antigens other than HRP. In addition, the antigen exposure site, the number of specific antibody-producing cells, and the number of specific antibody-producing cells were identified.

项目成果

「酵素抗原法」の技術的検討

“酶抗原法”技术研究

• 发表时间: 2007
• 作者: Harihara S;Nakamura K;Fujiwara M;Arai T;Sawabe M;Takeuchi F;Takuho K.;田久保 海誉.;Takubo K.;Tsutsumi Y;堤 寛;堤 寛;水谷泰嘉
• 通讯作者: 水谷泰嘉

胆道感染症の病理

胆道感染的病理学

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本外科感染症学会誌 3(3)
• 作者: Harihara S;Nakamura K;Fujiwara M;Arai T;Sawabe M;Takeuchi F;Takuho K.;田久保 海誉.;Takubo K.;Tsutsumi Y;堤 寛
• 通讯作者: 堤 寛

Histopathological diagnosis of infectious diseases using patients' sera

利用患者血清进行传染病的组织病理学诊断

• 发表时间: 2007
• 期刊: Seminar Diagnost Pathol 24(4)
• 作者: 堤寛;鈴木舞;塩竈和也;堀口英久;佐野壽昭;馬原文彦;馬原文彦;Tsutsumi Y
• 通讯作者: Tsutsumi Y

完全病理学各論 全12巻

完整的病理学理论，12卷

• 发表时间: 2007
• 作者: Tamakuma K;Takeda K;Miyamoto K;Inada K;Utsunomiya H;Fujita H;Mahara F;Tsutsumi Y.;Tsutsumi Y;堤寛;堤 寛
• 通讯作者: 堤 寛

糖尿病合併症の病理.感染症

糖尿病并发症的病理学。

• 发表时间: 2006
• 期刊: 病理と臨床 24(7)
• 作者: Harihara S;Nakamura K;Fujiwara M;Arai T;Sawabe M;Takeuchi F;Takuho K.;田久保 海誉.;Takubo K.;Tsutsumi Y;堤 寛;堤 寛
• 通讯作者: 堤 寛