新しい分子生物学的手法(T-RFLP)を用いた腸内細菌叢の解析と移植後合併症

使用新分子生物学方法 (T-RFLP) 分析肠道微生物群和移植后并发症

• 批准号: 18659285
• 负责人: 町田 真一郎
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659285/
• 关键词: 腸内細菌叢; 造血幹細胞移植; Terminal RFLP法; GVHD

移植後GVHD発症に腸管粘膜からのLPS流入が深く関与していることから、GVHDと腸内細菌叢の関係をTerminal-RFLP法を用い、検討している。東海大学医学部血液内科において2004年11月以降行われた同種造血幹細胞移植7症例について、移植2週間前より週1回、合計12回の糞便を採取し、DNAを抽出、細菌の16SrRNAに特異的でかつ普遍的なプライマーを用いてPCRを施行後、4種類の制限酵素によりPCR産物を消化し、そのバンドパターンが移植後経過によりどのように変化するかをクラスター解析により検討し、各症例とも移植前と移植後2週間目の腸内細菌叢の間に、著しいクラスターの変化を認めている。今年度我々は、このような現象が同種移植症例においてのみ起こる現象であるのかを確認するために、自家移植症例をコントロールとして、サンプルの採取を行った。現在までに6症例のサンプルを採取しており、十分なコントロールが得られた。現在までに本研究参加に同意された症例は26症例に上っており、これらの症例の解析をすすめることにより、これまで不明瞭であった腸内細菌叢と造血幹細胞移植療法の関係を明らかにすることが可能と考える。

The relationship between LPS influx from intestinal mucosa and GVHD in post-transplant GVHD development was investigated by Terminal-RFLP. Department of Hematology, Tokai University School of Medicine November 2004 7 cases of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, 1 week 2 weeks before transplantation, 12 times in total stool samples, DNA extraction, bacterial 16S rRNA, specific PCR, PCR products digestion, 4 types of restriction enzymes The changes of intestinal flora between pre-transplantation and 2 weeks post-transplantation were identified in all cases. This year, the phenomenon of allotransplantation is confirmed. Now, 6 cases of this disease are taken, and 10 cases are taken. The study was conducted in 26 patients and the relationship between intestinal flora and hematopoietic stem cell transplantation therapy was clarified.