脂肪組織由来間葉系幹細胞より誘導した肝細胞様細胞塊を用いた新たな治療法の開発

利用源自脂肪组织的间充质干细胞的肝细胞样细胞簇开发新的治疗方法

• 批准号: 19659341
• 负责人: 文元 雄一
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659341/
• 关键词: 脂肪組織; 間葉系幹細胞; 肝細胞

我々は、ヒト脂肪組織由来間葉系幹細胞(Adipose derived mesenchymal stem cells、以下ADSCsと略す)の分離、培養法と肝細胞様細胞塊への分化誘導法を開発した。ヒトADSCsより分化誘導された肝細胞様細胞の機能を動物実験にて検定した。CCL4の長期投与にて慢性肝炎モデルとしたNOD-SCIDマウスの腎皮膜下に移植した。移植10日目の血清T-Bil値が正常域まで是正された他、摘出したグラフトの組織学的検査にてもグラフトは腎被膜下に生着しており、アルブミン染色やPAS染色で陽性であった。すなわち、肝細胞様細胞塊が組織学的にも良好に機能していることが証明できた。現在のヒトADSCsの分化誘導法がマウスADSCsに対しても同様に効率よく肝細胞様細胞塊へと誘導するかどうかを検討した。(1)マウス脂肪組織よりADSCsを分離、培養し、間葉系幹細胞であることを確認した。(2)ヒトと同様の方法にてマウスADSCsを肝細胞様細胞塊に分化、誘導した。(3)分化誘導した肝小葉様細胞塊が(i)western blotおよび免疫染色にてAlbumin合成能を有することを確認した。(ii)Elisa法にてアンモニア負荷後に尿素生成していることを確認した。(iii)PAS染色にてグリコーゲン合成を有することを確認した。以上より、マウスADSCsからもヒトADSCsと同様に肝細胞様細胞塊が分化誘導できることが証明できた。

We have developed methods for isolation, culture and differentiation induction of subcutaneous adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSCs). ADSCs are induced to differentiate into hepatocytes and function in animals. CCL-4 long-term administration and chronic hepatitis B The serum T-Bil value at day 10 of transplantation was positive in normal domain, positive in histological examination, positive in subrenal capsule and positive in PAS staining. Histologically, the liver cell mass was proved to be well functioning. Now, the differentiation method of ADSCs is discussed. (1)Isolation, culture and identification of mesenchymal stem cells (2)The same method was used to differentiate and induce ADSCs. (3)Western blot and immunostaining were used to confirm the presence of Albumin synthesis. (ii)Elisa method is used to confirm the generation of urea after load loss. (iii) the presence of a dye; ADSCs and liver cell mass differentiation are demonstrated above.