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微生物のアミラ-ゼ及びセルラ-ゼにおける天然結晶基質の分解機構

微生物淀粉酶和纤维素酶中天然结晶底物的降解机制

基本信息

批准号：
01470125
负责人：
林田晋策
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1990
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01470125/
关键词：
グルコアミラ-ゼ αーアミラ-ゼシクロデキストリン黒麹菌生澱粉親和部位セルラ-ゼ親和部位糸状菌生澱粉分解性アミラ-ゼ糸状菌セルラ-ゼの分類系微結晶セルロ-スに対する親和部位 C_1及びCx型セルラ-ゼ細菌糖化型αーアミラ-ゼ生澱粉分解能の阻害

项目摘要

河内黒麹菌グルコアミラ-ゼIの生澱粉分解機構を追究し、生澱粉分解能発現の必須構造は、水溶性基質に関与する酵素部分であるGAI'領域(Val^<469>上流)と、生澱粉ミセルに吸着し、これを水和溶解させる生澱粉親和部位(Ala^<470>下流)から成り立っていることを明らかにした。親和部位は容易にプロテア-ゼにより離脱して生澱粉分解能が特異的に失活し、GAI'になった。それ故取得したプロテア-ゼ・グリコシダ-ゼ欠損変異株は、親株の2倍量の糖鎖をもち、2.5倍の生澱粉分解能を示すグルコアミラ-ゼRを産生し、結合糖鎖の重要性が立証された。次いでシクロデキストリンによる生澱粉分解の特異的阻害を見いだし、シクロデキストリンが親和部位のC末端領域に結合する事を認めた。また親和部位のGPーI領域が生澱粉分解促進能を有する事を認め、生澱粉親和部位は、生澱粉ミセルの末端又は微小水和部位に親和性をもつVal^<469>下流の領域と、生澱粉ミセルの水和と分解を促進するGPーI領域(Ala^<470>ーVal^<514>)から成りたっていることを明らかにした。一方、細菌液化型及び糖化型αーアミラ-ゼも、糸状菌のαーアミラ-ゼ及びグルコアミラ-ゼと同様、生澱粉分解能を有するI型と、親和部位を欠失し生澱粉分解能を示さないII型に分類された。他方、糸状菌セルラ-ゼは、エンド及びエキソ両型とも水溶性基質分解能に多様性が認められたけれども、天然基質分解能をもつI型グル-プと、親和部位を欠失し天然基質分解能を示さないII型グル-プに分類された。さらにエキソセルラ-ゼの親和部位を分離精製し、その構造と機能を追究している。以上の諸結果から、アミラ-ゼ及びセルラ-ゼの天然基質分解能の発現には、活性部位を持ち、水溶性基質分解能を有する酵素領域にさらに天然基質に吸着し、これを微小部分的に水和可溶化させるための“親和部位"領域の付加が必須であることを立証した。

The research on the raw starch decomposition mechanism of Kawachi Black Koji bacterium, the necessary structure for the realization of raw starch decomposition ability, and the water-soluble matrix and enzyme part of GAI' field (Val^ <469>Upper flow)と, raw starch ミセルに absorbs し, これをwater and dissolves させるraw starch pro And the part (Ala^<470> obscene) is made of っていることを明らかにした. The affinity part is easy to detach and decompose raw starch, and it has specific deactivation ability and GAI's deactivation ability. Therefore, we obtained the したプロテア-ゼ・グリコシダ-ゼ剧変different strain, 2 times the amount of the parent strain, sugar lock をもち, 2 .5 times the decomposition of raw starch shows the production of すグルコアミラ-ゼRを and proves the importance of binding sugar locks.いでシクロデキストリンによるSpecial hindrance to the decomposition of raw starch を见いだし, シクロデキストリンが The C-terminal domain of the affinity part is combined with the する事を recognized めた. The raw starch decomposition promotion ability of the GP field of the raw starch affinity part is the raw starch affinity part, the raw starch affinity part is the end and the minute water and the affinity of the part is Val^<46 9> Downstream field, raw starch water and decomposition promotion field GP I field (Ala ^<470>ーVal^<514>)から成りたっていることを明らかにした. On the one hand, bacterial liquefaction type and glycation type αーアミラ-ゼも, rice-shaped bacteria αーアミラ-ゼ and びグルコアミラ-ゼと are the same様. The raw starch decomposition ability is type I and the affinity part is missing. The raw starch decomposition ability is classified as type II. Other prescriptions, Shitobacteria セルラ-ゼは, エンド and びエキソ両type ともwater-soluble matrix decomposition ability and multi-functionality められたけれども, natural The matrix decomposition energy of type I グル-プと and the affinity part of を are missing are the natural matrix lysis energy of type II グル-プに classification された. The さらにエキソセルラ-ゼのaffinity parts are separated and refined, and the そのstructure and functions are investigated. The above results show that the natural matrix decomposition ability of Amir-ゼ and Aminara-ゼの発appears, the active site holds, and the water-soluble matrix decomposition ability has the enzyme collar. The natural base of the domain にさらににabsorbs し, これをa tiny part of にwater and the soluble させるための "affinity part" domain のFUGAが must be certified であることを.