大腸菌における駆動力発生酵素および細胞質性フィラメントの分子生物学的研究

大肠杆菌驱动力产生酶和细胞质丝的分子生物学研究

基本信息

批准号：
04454005
负责人：
平賀壯太
金额：
$ 4.74万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は先に大腸菌の染色体分配に関与する遺伝子群を解析するために無核細胞を放出しながら増殖するmukB変異株を多数分離してきた。単離したmukB遺伝子の塩基配列より演繹したMukB蛋白は177kDaの巨大な分子である。MukB蛋白の二次構造からN端とC端が球状で中央部はαヘリックスのコイルドコイル構造をとりうることが示唆された。本研究では、MukB蛋白を過剰産生する細胞の抽出液よりMukB蛋白を精製し、次のことを明かにした。1. 精製したMukB蛋白は500mM KCl存在下で365,000ダルトンであることが低角度レーザー光散光法により明かになった。このことはこの条件下でMukB蛋白は二量体を形成することを示している。2. MukB蛋白の分子構造を低角度白金蒸着電顕法で解析し、MukBの二量体はN端とC端が球状で中央部が棒状の形態をとることが明かになった。棒状領域にはヒンジ部位があり、ここで折れ曲がってV字型をとる性質がある。3. MukB蛋白はDNA結合能を持つことをゲルシフト法により明かにした。4. MukB蛋白はZnイオン存在下でATPおよびGTP結合能がある。一方、大腸菌のF Pil Hag変異株(細胞表層のべん毛や線毛を持たない株)の細胞抽出液のゲル濾過分画に存在するラセン状巨大分子(スピロゾーム)を精製し、この分子がアルコール脱水素酵素のポリマーであることをそのN端のアミノ酸配列により明かにした。また、ピルビン酸脱水素酵素、デヒドロリポアミドアセチールコリントランスフェラーゼ、ポリアミドデヒドロゲナーゼが高分子複合体(670,000ダルトン以上)を形成していることを明かにした。

我们先前已经分离了大量生长的MUKB突变体，同时释放了无核细胞，以分析与大肠杆菌的染色体分布相关的基因。从分离的MUKB基因的碱基序列推导的MUKB蛋白是一个巨大的177 kDa分子。 MUKB蛋白的二级结构表明N和C端是球形的，并且中央部分可以具有α-螺旋的盘绕线圈结构。在这项研究中，MUKB蛋白是从过量生产MUKB蛋白的细胞中纯化的，揭示了以下几点：1。低角度激光光散射方法表明，在500 mm KCl存在下，纯化的MUKB蛋白为365,000 daltons。这表明在这些条件下，MUKB蛋白会形成二聚体。 2。使用低角度铂蒸发电子显微镜分析了MUKB蛋白的分子结构，并发现MUKB的二聚体采用球形N和C的形式，中心部分是杆状的。杆状区域具有铰链部分，它弯曲并具有V形状。 3。凝胶移位方法表明MUKB蛋白具有DNA结合能力。 4。MUKB蛋白在存在Zn离子的情况下具有ATP和GTP结合能力。同时，将大肠杆菌的细胞提取物中存在的螺旋大分子（螺旋体）（螺旋体）纯化（一种在细胞表面上没有鞭毛或pilus的菌株），并且在其N-末端的氨基酸序列在其N-末端均显示出这种分子是一种葡萄酒酶的polymogentase polymogenton。还揭示了丙酮酸脱氢酶，脱氢酰胺乙酰胆碱转移酶和聚酰胺脱氢酶形成聚合物复合物（超过670,000 daltons）。