AFP遺伝子構造解析と高分化型微小肝癌の遺伝子診断に関する研究

高分化显微镜下肝癌AFP基因结构分析及基因诊断研究

• 批准号: 05670457
• 负责人: 青柳 豊
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670457/
• 关键词: アルファフェトプロテイン(AFP); 肝細胞癌; アミノ酸一次構造

本研究においては,肝細胞癌において発現されるアルファフェトプロテイン(AFP)遺伝子を対象にして,特にAFPの蛋白一次構造をコードする部分で,かつ変異が起きやすいとされるGC含量の高い10,11,12エクソンを中心にその変異の有無ならびにそれらを用いた肝細胞癌の早期診断を試みた.また,純化AFPより直接アミノ末端一次構造の決定もあわせておこなった.部検,手術材料12名から得られた肝細胞癌組織よりクロロホルム-フェノール抽出を行いインタクトのDNAならびにRNAを得ることが出来た.さらに,11番目エクソン開始点5'末端側-82より-59番目,-77より-54番目+176より+198番目,+181より+203番目の4個のプライマーを用いたPCR法にて想定されるサイズのDNAを得ることが出来た.また,mRNAインタクトの状態で精製することが出来た.現在これらのプライマーを用いて増幅したものについてダイレクトシークエンスを施行中である.他方,AFPの蛋白を用いたアミノ末端一次構造については,肝細胞癌5例,肝芽腫1例,AFP産生性消化管腫瘍2例,臍帯血由来AFP各々について純化精製後,気相シークエンスアナライザーを用い,約20個を決定した.この結果においては,個々の症例においてアミノ末端はheterogeneousであり,本研究者らが以前肝細胞癌1例ならびに臍帯血由来AFPにおいて報告した結果(Cancer Res.,37:3663-3667,1977)を確認すると同時に,この不均一性が単なるプロテアーゼによる消化の結果ではなく,疾患特異性を示唆する可能性が得られた.さらに,アミノ酸コード部分を検索することにより,肝細胞癌に特異的な変異が検出される可能性が示された.

In this study, hepatocellular carcinoma (HCC) was detected in the middle of the study, especially in the primary structure of AFP protein, and the GC content was high in the middle of the study. The purification of AFP is directly related to the determination of the primary structure of the terminal. Department of surgery, surgical materials, 12 cases of hepatocellular carcinoma tissue, extraction of DNA, RNA, etc. In addition, the 11-point The mRNA status was refined. Now we're going to use it to increase the amplitude. The AFP protein was used in 5 cases of hepatocellular carcinoma, 1 case of hepatoma, 2 cases of digestive tract swelling caused by AFP, and 20 cases of umbilical cord blood. The results of this study were reported in one case of hepatocellular carcinoma (HCC) and one case of umbilical cord blood AFP (Cancer Res., 37:3663- 3667, 1977), and the possibility of a disease-specific response was also identified. In addition, the possibility of hepatocellular carcinoma-specific differential detection was shown.

项目成果

Igarashi Kentarou: "Sequence analysis of the proximal promotor region of the human alpha-fetoprotein gene in hepatolellulu caranama." Cancer letters. (in press). (1994)

Igarashi Kentarou：“肝细胞中人类甲胎蛋白基因近端启动子区域的序列分析。”

Aoyagi Yutaka: "Molecular discrimination between alpha-fetoprotein from patients with hepatocellular carcinama and non-neoplaotic liuer diseases by their canbohydrate structures." International Journal of Oncology. 4. 369-383 (1994)

Aoyagi Yutaka：“通过碳水化合物结构对肝细胞癌和非肿瘤性柳尔病患者的甲胎蛋白进行分子区分。”

Aoyagi Yutaka: "Highly enhanced fucosylation of alpha-fetoprotein in patients with germ cell tumol." Cancer. 72. 615-618 (1993)

Aoyagi Yutaka：“生殖细胞肿瘤患者中甲胎蛋白的岩藻糖基化高度增强。”

Saitoh Atsushi: "Structural analysis on the sugar chain of alpha-1-antitrypsin:Presence of fucosylated biantennary glycan in hepcto cellulu carunama." Arch Biochem Biophyo. 303. 281-287 (1993)

Saitoh Atsushi：“α-1-抗胰蛋白酶糖链的结构分析：hepcto cellulu carunama 中存在岩藻糖基化双触角聚糖。”