肝実質細胞・非実質細胞の混合培養によるハイブリッド型人工肝の機能改善に関する研究

肝实质细胞与非实质细胞混合培养混合型人工肝功能改善研究

• 批准号: 05671037
• 负责人: 中島 保明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671037/
• 关键词: ハイブリッド型人工肝; 肝非実質細胞; 肝上皮様細胞; 混合培養; 酸素濃度

1.肝細胞・肝非実質細胞の混合培養法の基礎的検討肝細胞と肝非実質細胞の混合培養を目的に、肝非実質細胞の分離培養法を検討した。コラゲナーゼおよびプロナーゼを用いることにより肝非実質細胞の分離培養に成功したが、細胞収量が少なく、継代培養が困難であった。非実質細胞の分離培養を繰り返すうちに、著明な増殖能を有する上皮様細胞が分離され、この上皮様細胞は明るい細胞質を持つ比較的大型の、肝細胞とは明らかに異なる細胞であった。この上皮様細胞はトリプシンを用いて継代培養が可能であり、著明に増殖させることができ、さらにDMSOおよびFCSを添加した培養液中で凍結保存することも可能であった。また、この上皮様細胞は抗第VIII因子抗体を用いた免疫組織染色では染色されず、類洞内皮細胞・血管内皮細胞ではないことが判明し、現在この上皮様細胞を同定中であると同時に、肝細胞との混合培養を行い肝細胞に対する影響を検討中である。2.各種酸素分圧下における至適肝細胞培養環境の検討肝細胞は低酸素状態に弱いと一般に考えられているが、これを培養肝細胞で実際に検討した報告はみられず肝細胞機能を十分に発揮する至適条件を探る意味で、培養肝細胞を種々の酸素分圧条件下で培養した。まず、マルチガスインキュベーター内で、培養液中の溶存酸素分圧が、インキュベーター内の酸素分圧と比例することを確認した。次に、10,20,40%の各種酸素分圧下で肝細胞を培養し、その形態を観察するとともに糖新生能・尿素合成能などの肝細胞機能を測定した。その結果、酸素濃度が20%で最も良好な形態および機能発現を認め、検討した酸素分圧の条件下では、空気相が初代肝細胞培養に最も適していると判断された。

1. Liver non-cell mixed culture method, liver non-cell mixed culture method, liver non-cell culture method, liver cell culture method, non-cell culture method. In the first place, the number of cells in the liver was isolated from each other, the number of cells was low, and the number of cells was low. Non-specific cells are separated from each other, and there are epithelial cells, epithelial cells, large cells, liver cells, and liver cells. The epithelia, cells, and FCS were added to the culture solution. It was possible to save them. The antibodies against factor VIII in epithelial cells and epithelial cells were detected by immunocytochemical tissue staining and vascular endothelial cell staining, respectively. Now, the epithelial cells were identified in the same way, and the liver cells were cultured in the same way. two。 In all kinds of acid fractionation, the low-acid state of liver cells in the environment is low, and the cells of liver cells are low in acid. in general, the cells of liver cells can be cultured under the conditions of low acid concentration and low acid content. The concentration of soluble acid in the solution, the proportion of acid in the solution, the percentage of acid in the solution, the proportion of acid in the solution, the ratio of acid in the solution, the ratio of acid in the solution, the proportion of acid in the solution, the ratio of acid in the solution Under the acid fractionation of 40% of each acid fraction, the cell culture and morphology analysis were used to observe the synthesis of glucose, urea, urea, glucose, glucose, urea, glucose, urea, urea, glucose, urea, glucose, urea, urea, glucose, urea, urea, glucose, glucose, urea, glucose, glucose, urea, urea, glucose, glucose, urea, glucose, urea, glucose, The results showed that the optimal pH value of 20% of the pH value was 20%. Under the condition of acid fractionation, the most effective cell culture of primary liver cells could be detected.