筋細胞の組織構築における細胞骨格蛋白質タリンの役割について

细胞骨架蛋白talin在肌肉细胞组织构建中的作用

• 批准号: 07660360
• 负责人: 六車 三治男
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660360/
• 关键词: タリン; アクチン; 細胞骨格蛋白質; 細胞接着斑; カルパイン

タリン(230kD)をタンパク質分解酵素、カルパインで処理して得られたC-端側の190kD断片にはアクチン結合能があることをすでに明らかにしたが、本研究の目的はさらに190kD断片中の詳細なアクチン結合ドメインを調べると共に、N-端側の47kD断片と細胞膜との連繋の可能性も探ることである。そこでまず、190kD断片を酵素処理した分解産物を一次元あるいは二次元電気泳動により泳動後、それらのバンドあるいはスポットをPVDF膜に転写し、アクチンオーバーレイ法によりアクチン結合能を有するバンドあるいはスポットを確認した。それらのバンドあるいはスポットをマイクロシケンス法により、N-端側からのシーケンスを調べた。また、アクチン結合能を有しないスポットのシーケンス解析も行った。これらの結果から、タリンのN-端より529アミノ酸残基から852アミノ酸残基までの範囲にアクチン結合ドメインがあることが明らかになった。また、作製したモノクローナル抗体(No. 1, 2, 3. 4)のタリン分子の認識部位を知るためにエピトープ解析を行った。No. 4の抗体は他の3種とは異なるタリンの部位を認識し、Actin Competition法を用いたELISA法による分析結果から、アクチンとタリンの結合の阻害活性を有する新奇なモノクローナル抗体であることが明らかになった。この抗体も二次元電気泳動のアクチン結合能を有するスポットを認識した。一方、タリンのN端側47kD断片、C端側190kD断片と、細胞膜を主に構成しているリン脂質であるホスファチジルコリンとホスファチジルセリンの混合物との共沈実験では、190kD断片ではなく、47kD断片がリン脂質と相互作用することが示された。またそのとき、ホスファチジルコリンではなく、酸性のリン脂質であるホスファチジルセリンが必要であることが明らかになった。

タリン (230kD) をタンパクmass decomposing enzyme, カルパインで treated して got られたC -The end-side 190kD fragment has a binding energy of 190kD , the purpose of this study is to combine the details of the 190kD fragment with the We have explored the possibility of connecting the 47kD fragment on the N-terminal side to the cell membrane.そこでまず, 190kD fragment をEnzyme treatment したdegradation product をOne-dimensional あるいはSecond-dimensional electrophoresis によりAfter electrophoresis, それらのバンドあるいはスポットをPVDF filmに転WRITINGし、アクチンオーバーレイ法によThe combination of りアクチンを有するバンドあるいはスポットをconfirmationした.それらのバンドあるいはスポットをマイクロシケンス法により, N-terminal side からのシーケンスを动べた.また, アクチンcombination energyを有しないスポットのシーケンスanalytic も行った. The result of これらのから、タリンのN-terminal より529アミノ acid residue から852アミThe acid residues of the acid residues are combined with the ドメインがあることが明らかになった.また, したモノクローナル antibody (No. 1, 2, 3. 4) のタリンmolecule のcognition part を知るためにエピトープ ANALYSIS を行った. No. 4 のAntibodies は His 3 kinds と は な る タ リ ン の parts を cognition し, Actin Competition method is used and ELISA method is used to analyze the results. Novel conjugation-blocking activity of the novel anti-antibodies has been demonstrated.このAntibody も Two-dimensional electrophoresis のアクチン binding energy するスポットをKnowledge した. On one side, the 47kD fragment on the N-terminal side and the 190kD fragment on the C-terminal side of the cell membrane.スファチジルセリンのmixtureとのco-precipitation実験では、190kD fragmentではなく, 47kD fragment がリンlipid and interaction することがshow された.またそのとき、ホスファチジルコリンではなく、Acidic lipidであるホスファチジルセリンが必であることが明らかになった.

项目成果

M. Muguruma et al.: "Organization of the Functional Domains in Membrane Cytoskeletal Protein Talin" J. Biochem.117. 1036-1042 (1995)

M. Muguruma 等人：“膜细胞骨架蛋白 Talin 中功能域的组织”J. Biochem.117。

M. Muguruma et al.: "Molecular Organization of the Membrane Cytoskeletal Protein Talin" Proceedings of the International Symposium on Membrane Proteins. 84 (1996)

M. Muguruma 等人：“膜细胞骨架蛋白 Talin 的分子组织”国际膜蛋白研讨会论文集。