家畜におけるエンドトキシンショック時の血中No代謝物の測定法の確立とその臨床方法

家畜内毒素休克血中无代谢物测定方法的建立及临床方法

• 批准号: 07660416
• 负责人: 平岡 和佳子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Meiji University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660416/
• 关键词: NO; マクロファージ; エンドトキシンショック; グリース反応; インターフェロンガンマ; サイトカイン; sG蛋白質; iNOS

基礎的実験として、単離マクロファージを用いて、各種サイトカインを用いた刺激により発生するNOの細胞毒性や細胞分化における役割を解析した。実験に用いたClostridium botulium exoenzyme C3(C3)はsG蛋白質(Small molecular weight GTP-binding proteins)のひとつであるRhoをADP-リボシル化することによって、不活化することが知られている。このC3がインターフェロンガンマによるNOの生成に関与するかどうかを観察した結果、Rhoがインターフエロンガンマによって誘発される、iNOSの遺伝子発現に関わっていることがあきらかとなった。これらの系におけるNOの検出系としては、NOの代謝物であるところのNO^<2->+NO^<3->の定量測定法として、グリース反応が用いられているが、この方法は、感度が低く、実際に血清中のNOを測定することは困難であると思われる。我々は、グリース反応よりも、検出感度が高いと報告されている2,3-ジアミノナフタレン(DAN)を用いての、蛍光光度法によるNOの検出と、N-メチル-D-グルカミンジチオカルバメート鉄錯体を用いたESR-スピントラッピング法を比較検討した。DANによるNOの検出限界は、ほぼ、グリース反応の50倍、スピントラッピング法では、10倍の検出感度が得られた。また、実際のニトロシルチオールの特異抗体の作成については、抗原として、内因性の物質として牛血清アルブミン、さらにはほ乳動物体内には存在しないヘモシアニンを用いそれぞれ、NO飽和水に溶解してニトロ化を行った。現在、これらの物質を用いて兎に免疫し、ニトロ化タンパク質の特異抗体の精製をおこなっており、今後ニトロ化タンパク特異抗体を用いて、感染を受けた家畜の血清中のニトロ化タンパク質の定量をおこなっていきたい。

All kinds of drugs are used to stimulate the production of NO cells, the differentiation of cells, the analysis of cell toxicity, and the analysis of cell differentiation. Clostridium botulium exoenzyme C3 (C3) sG protein (Small molecular weight GTP-binding proteins) was used in this study. Please check the results of the test results, the results of the NO, the results of the results, the results, the This is due to the fact that the NO has been detected in the system, and that the NO substitute has been used in the quantitative analysis of NO^ & lt;2->+ NO^ & lt;3->. The method has been used to determine the sensitivity, sensitivity, and NO in the serum of the patients. We are very sensitive, sensitive The DAN has reached the limit of 50 times, the sensitivity is 50 times higher than the limit, and the sensitivity is 10 times higher than that of the limit. The specific antibodies were made into antigens, antigens, endogenesis substances, bovine serum, and milk products. The presence of antigens in dairy products was characterized by the use of antigens, NO, and water. At present, the animals are immunized and immunized with specific antibodies, and in the future, specific antibodies are used in the sera of infected animals.

项目成果

M. Kojima et al.: "The small molecular weight GTP-binding proteins(Rho)regulate the superoxde production from polymorhponuclear leukocytes" Magnet. Reson. Med.7. 113-116 (1996)

M. Kojima 等人：“小分子量 GTP 结合蛋白 (Rho) 调节多形核白细胞的超氧化物产生”Magnet。

O. Inanami et al.: "The superoxide production from opsonized-zymosan-and PMA-stimulated polymorphonuclear leukocytes in neonatal cakf." Magnet. Reson. Med.7. 117-120. (1996)

O. Inanami 等人：“新生儿 cakf 中经调理的酵母聚糖和 PMA 刺激的多形核白细胞产生的超氧化物。”

K. Suzuki et al.: "Effects of Clostridium Botulinum exoenzyme C3 on IFN-γ-induced nitric oxide production from mouce peritoneal macrophage" Meeting of the oxygen Society Nov.1995 Suppl.130 (1995)

K. Suzuki 等人：“肉毒杆菌外切酶 C3 对小鼠腹膜巨噬细胞 IFN-γ 诱导的一氧化氮生成的影响”氧气学会会议 1995 年 11 月增刊 130 (1995)

W. Hiraoka et al.: "Loss of cell viability induced by X-rays, H_2O_2 and ^1O_2 in Chinese hamster V79 cells judged by dye exclusion and clonogenicity" Congress Proceedings of Radiation Research 1895-1995. 1. 147 (1995)

W. Hiraoka 等人：“通过染料排除和克隆性判断中国仓鼠 V79 细胞中 X 射线、H_2O_2 和 ^1O_2 诱导的细胞活力丧失”，1895-1995 年放射研究国会论文集。

M. Kuwabara et al.: "Enhancement of X-ray-induced formation of 8-hydroxyguanine(8-OHGua)by the spin trap α-phenyl-t-butylnitrone(PBN)and its effects on cell survival" Congress Proceedings of Radiation Research 1895-1995. 1. 290 (1995)

M. Kuwabara 等人：“自旋陷阱 α-苯基-叔丁基硝酮 (PBN) 增强 X 射线诱导的 8-羟基鸟嘌呤 (8-OHGua) 形成及其对细胞存活的影响”国会辐射会议论文集研究1895-1995。1。290（1995）。